论文部分内容阅读
目的观察阿魏酸钠(sodiumferulate，SF)对淀粉样β蛋白(amyloidbeta-protein，Aβ25-35)激活巨噬细胞引起神经细胞损伤的保护作用，并初步探讨其作用机制。
方法取新生2～4d的SD大鼠乳鼠小脑，进行神经细胞培养，培养8d后加入小鼠腹腔巨噬细胞联合培养，24h后加入10μmol·L-1的Aβ25-35，保护组同时加入不同浓度(10μmol·L-1，100μmol·L-1，500μmol·L-1，1mmol·L-1)SF共孵育。48h后，应用免疫组织化学方法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和微管相关蛋白2(MAP-2)的表达水平，采用ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌量，应用Griess法检测培养液中的一氧化氮(NO)生成量，LDH检测试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量。Westernblot观察p38MAPK的蛋白表达水平。另外，将Aβ25-35激活和未加入Aβ25-35的巨噬细胞上清液分别移入单独培养的神经细胞中，通过Hoechst33258染色检测神经细胞的凋亡百分比。
结果加入Aβ25-35(10μmol·L-1)到单独培养的巨噬细胞，48h后，测定培养液内TNF-α分泌量，结果表明，可使TNF-α分泌量明显增加，由空白对照组的18ng·L-1增加到282ng·L-1(P＜0.01)，NO生成量也呈相同的增加趋势，由空白对照组的26μmol·L-1增加到85μmol·L-1(P＜0.01)，iNOS的表达也相应增加。与Aβ25-35组相比，SF(10μmol·L-1，100μmol·L-1，500μmol·L-1，1mmol·L-1)能显著地抑制Aβ25-35引起的TNF-α分泌量增加、NO生成量增加以及iNOS表达增加，并呈剂量依赖性。在巨噬细胞和神经细胞联合培养中，Aβ25-35组与空白对照组相比，LDH漏出量明显增加，由23U·L-1增加到172U·L-1，MAP-2表达阳性的神经元数目相应减少，与Aβ25-35组相比，SF(10μmol·L-1，100μmol·L-1，500μmol·L-1，1mmol·L-1)能显著地降低LDH漏出量，使MAP-2表达阳性的神经元数目明显增加，也呈剂量依赖性。Aβ25-35(10μmol·L-1)可使巨噬细胞的p38MAPK表达明显增加，在加入Aβ25-352h时p38MAPK表达达高峰，SF(500μmol·L-1，1mmol·L-1)能明显抑制Aβ25-35引起的p38MAPK表达增加。将Aβ25-35激活的巨噬细胞上清液移入到单独培养的神经细胞48h后，可使凋亡神经细胞的百分比明显增加，从正常11％增加到74％。
结论1.SF对Aβ25-35引起的培养的神经细胞具有保护作用。2.SF对神经细胞损伤的保护作用机制与SF抑制巨噬细胞的TNF-α、NO释放以及p38MAPK的表达有关。