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作为成年动物体内唯一能进行终生自我更新且遗传亲代基因给子代的一类二倍体永生细胞群,精原干细胞（spermatogonial stem cells,SSCs）持续、高产的精子发生进程使其成为体外操作的理想宿主干细胞,十年来各种属动物的成功移植有力促进了相关技术的完善与发展。为了给后续的转基因动物生产提供理论依据和技术方法,本实验主要进行山羊精原干细胞的分离、培养与移植研究,结果如下: 1、 采用四种酶组合分离二月龄关中奶山羊精原细胞,A 组:胶原酶Ⅳ;B 组:胶原 酶Ⅳ+透明质酸酶;C 组:胶原酶Ⅳ+透明质酸酶+胰蛋白酶与EDTA;D 组:胶原酶Ⅳ+透明质酸酶+胰蛋白酶与EDTA + Dnase I。结果C、D 组不但组织块解离效果及细胞离散程度均较A、B 好,且原代培养细胞团块数少。多重比较C、D 组显著优于A、B 组;C 组与D 组差异不显著,但与A、B 组比较细胞存活率、圆形细胞比率及贴壁率差异极显著,结果胶原酶Ⅳ+透明质酸酶+胰蛋白酶与EDTA 是较经济有效的山羊SSCs 分离酶组合。 2、为探索山羊SSCs 体外培养体系,我们收集2 月龄关中奶山羊睾丸,一步酶法消 化分离曲细精管细胞,台盼兰检测平均存活率82.7%,以 1×106/ml 接种含15%胎牛血清（FBS）DMEM/F12 培养瓶,37℃,5% CO2和饱和湿度条件下培养,4 wk 后FBS 逐渐降至10%。原代培养以多突起和片状的睾丸体细胞铺壁生长为主,10 d 左右精原干细胞数量增加,可见二联体和四联体,3 wk 左右有鸟巢状和山脉状集落形成,碱性磷酸酶染色阳性,培养30 d 集落数不断增加,散在分布有贴壁和漂浮精子,换液后精子丢失。挑取单集落重新接种铺壁的曲细精管体细胞饲养层后陆续有精子细胞及精子形成,主要分布于集落周围。 3、 为掌握山羊SSCs睾丸移植适用方法,我们采用两步酶法消化分离2～3月龄SSCs,以 6.5×106/ml 分别通过睾丸输出管、B 超介导睾丸网（多点和单点）和徒手睾丸网三种方法移植。结果经过输出管几乎不能移植细胞进曲细精管,B 超介导睾丸网移植每枚睾丸可移植约4.5 ml 细胞混合物,覆盖曲细精管35～40%,徒手最多移植了6 ml,曲细精管覆盖率最高达60%,性成熟前3 月龄左右羔羊作受体移植效果更好,表明睾丸网B 超介导下移植法较为适用,徒手睾丸网移植在熟练掌握下亦能获得相当B 超介导法移植效果,3 月龄公羔作受体移植效果较好。