【摘 要】
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目的流感病毒NS1基因敲除毒株(de1NS1毒株)的获得可以使我们建立更有效的生物学关系，主要表现在流感病毒繁殖周期和致病的过程中，流感病毒NS1蛋白和双链RNA活性蛋白激酶(PKR)之
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目的流感病毒NS1基因敲除毒株(de1NS1毒株)的获得可以使我们建立更有效的生物学关系，主要表现在流感病毒繁殖周期和致病的过程中，流感病毒NS1蛋白和双链RNA活性蛋白激酶(PKR)之间的生物学关系。资料表明缺少功能性的PKR可以使de1NS1毒株在其它非允许宿主中繁殖，这表明流感病毒NS1蛋白的主要功能是对抗或阻止PKR调解抗病毒效应。因此，本实验是为了证明流感病毒NS1蛋白对其复制和毒力的影响。
方法应用定点突变试剂盒在流感病毒H3N2的NS1基因上，将38位的精氨酸突变成丙氨酸，将41位的赖氨酸突变成丙氨酸；样品菌测序结果正确，将冻存的甘油菌活化，进行质粒DNA的大量制备。然后进行细胞转染包装成新的缺陷流感病毒，同时包装出原非缺陷流感病毒；再对二者进行转染后产量的测定，即流感病毒TCID50测定和空斑及空斑减少中和试验(PFU)。
结果本试验应用了定点突变技术对流感病毒NS1基因节段的第38位和第41位氨基酸残基进行突变，然后将突变的NS1基因节段与流感病毒其余7个基因节段进行包装成新的有缺陷的流感病毒。将原流感病毒的8个基因节段同时包装成无缺陷的流感病毒。然后将缺陷的流感病毒与无缺陷的流感病毒进行增殖，进行TCID50与PFU试验的测定，结果表明缺陷的流感病毒产量下降，这可以进一步证明流感病毒的NS1蛋白影响其复制。
结论实验发现包装后的突变毒株比未突变毒株的TCID50和PFU的值均低。从而，进一步证明了流感病毒NS1蛋白在流感病毒复制过程中起到重要的作用，故破坏其NS1蛋白可以影响流感病毒的复制，使其毒力下降。
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