【摘 要】
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目的： 探究下调miR-21的表达对雄激素非依赖型前列腺癌PC-3细胞生物学功能的影响及潜在的分子机制 方法： 1.检测不同前列腺癌细胞系中miR-21的表达量 通过Real-tim
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目的： 探究下调miR-21的表达对雄激素非依赖型前列腺癌PC-3细胞生物学功能的影响及潜在的分子机制 方法： 1.检测不同前列腺癌细胞系中miR-21的表达量 通过Real-time PCR检测雄激素依赖型前列腺癌细胞LNcap和雄激素非依赖型前列腺癌细胞PC-3中miR-21表达量的的差异。 2.构建低表达miR-21的稳定PC-3细胞株 通过脂质体转染技术，分别将miR-21 inhibitor（低表达miR-21组）和NC（阴性对照组）转染至PC-3细胞中。经过一定浓度G418筛选鉴定后，得到低表达miR-21的细胞株。 3.在稳定低表达miR-21的细胞株中进行细胞生物学功能实验 通过CCK-8法检测细胞增殖能力、利用流式细胞术AnnexinⅤ-FITC双染法检测细胞凋亡、通过划痕实验检测细胞迁移能力、利用Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。 4.在稳定低表达miR-21的细胞株中进行分子机制的探讨 通过Real-time PCR技术及WB技术分别检测TIMP3在基因和蛋白水平的变化。 结果： 1.Real-time PCR的结果显示，PC-3细胞中miR-21的表达量比LNcap细胞高。 2.转染miR-21 inhibitor后，PC-3细胞中miR-21的表达水平显著降低。 3.在PC-3细胞中，下调miR-21的表达后，其增殖、迁移及侵袭能力较对照组显著下降，凋亡能力较对照组显著增强。 4.miR-21下调后，其靶基因TIMP3在基因和蛋白水平较对照组显著升高。 结论： 1.雄激素非依赖型前列腺癌细胞比雄激素依赖型前列腺癌细胞miR-21表达量高，提示miR-21可以作为肿瘤进展的分子标志物。 2.成功构建了低表达miR-21的稳定PC-3细胞株。 3.在PC-3细胞中下调miR-21的表达可使得其增殖、迁移和侵袭能力下降，凋亡能力增强，TIMP3在基因和蛋白水平有所升高，提示miR-21和TIMP3可以做为临床治疗前列腺癌潜在的靶标。
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