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本研究从水牛腹股沟处脂肪组织中,通过胶原酶消化法分离出水牛脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs),观察原代及传代后细胞形态。将分离得到的细胞用低糖-DMEM(Dulbecco,s modified Eagle，s medium low glucose,LG-DMEM)和 α-MEM(α modified Eagle’s medium)培养和传代,进行生长曲线的评定,建立一种适合水牛ASCs分离和培养的方法。利用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)的方法检测水牛ASCs多能性相关基因表达情况,选择适当抗体,利用流式细胞技术,检测水牛ASCs多种表面抗原的表达情况,将水牛ASCs体外诱导分化(成脂、成骨、成软骨)后进行相关检测,初步探索水牛ASCs的诱导分化能力。利用实时荧光定量PCR(quantitive real time PCR,qRT-PCR)的方法检测水牛ASCs表观遗传修饰情况,探索水牛ASCs作为供体细胞并提高核移植效率的可行性。研究取得如下结果。(1)分离所得的原代ASCs细胞比血红细胞较大,在显微镜下呈单细胞悬液状态,接种4h后开始贴壁,48h后细胞呈现梭型或多边形。7-8d后细胞生长汇合并停止生长,呈长梭型、多角形-成纤维细胞样,体外培养10代细胞核型正常,表达多能性相关基因如Oct4、Sox2、Nanog、c-Myc和klf4,表明具有ASCs一般的生物学特性。细胞生长曲线的测定结果发现,LG-DMEM更适用于水牛ASCs的扩增培养,细胞倍增时间(population doubling time,PDT)平均为 2.071d。(2)利用流式细胞技术对水牛ASCs多种表面抗原表达情况进行了检测。结果显示,水牛ASCs表达间充质干细胞的表面标记如CD13、CD29、CD44,而造血干细胞的表面标记如CD45、CD31呈阴性。水牛ASCs经诱导后可成为脂肪细胞、骨细胞和软骨细胞,且表达这些细胞的相关特异性基因,说明水牛ASCs具有多向分化的能力。(3)通过qRT-PCR方法检测了不同代数水牛ASCs与水牛胎儿成纤维细胞(buffalo fetal fibr,oblasts,BFF)中 HDAC1、Dnmtl 的表达情况,比较了水牛ASCs的DNA甲基化、组蛋白乙酰化水平与BFF的差异。结果显示,所测不同代数的水牛ASCs的Dnmtl表达量极显著低于BFF(p<0.01);在HDAC1表达量上,P2、P5、P9及P11水牛ASCs显著低于P4代BFF(p<0.05),但P4和P7代水牛ASCs与BFF并无明显差异(P>0.05)。这结果表明,水牛ASCs具有较高的组蛋白乙酰化及较低的DNA甲基化水平,可能比BFF在核移植后更易于细胞核的重编程。上述结果表明,胶原酶分离法可分离得到水牛ASCs,且具有ASCs一般的生物学特性;LG-DMEM较a-MEM更适合用于水牛ASCs的扩增培养;水牛ASCs可以表达多能性相关基因如Oct4、Sox2、c-Myc、Nanog和klf4,以及间充质干细胞标记抗原(CD13,CD29,CD44),但不表达造血干细胞的表面抗原(CD31、CD45),且具有成脂、成骨、成软骨的多向分化潜能;水牛ASCs的HDAC1(除P4、P7代)、Dnmtl表达量均显著低于BFF,说明水牛ASCs具有较高的组蛋白乙酰化及较低的DNA甲基化水平,可能较BFF 更适合作为核移植供体细胞。