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目的:通过体外培养比较HepG2.2.15与HepG2细胞的形态结构、生长增殖以及TNF-α和IL-6在两种细胞系内和细胞体内成瘤组织中的表达情况,进一步了解HepG2.2.15细胞的生物学特性,为HBV体外的实验研究提供依据。
材料方法:人肝癌HepG2.2.15细胞由复旦大学上海医学院医学分子病毒学重点实验室馈赠,HepG2细胞购自于中国科学院上海细胞库。本课题组前期工作已完成HepG2细胞和HepG2.2.15细胞制造裸鼠皮下成瘤模型,用皮下成瘤组织造裸鼠肝脏原位组织种植模型。使用免疫化学方法和Westernblot检测TNF-α和IL-6在HepG2细胞和HepG2.2.15细胞中的表达,采用免疫组织化学方法和Western blot检测TNF-α和IL-6在HepG2细胞和HepG2.2.15细胞成瘤组织中的表达情况。
结果:HepG2.2.15细胞体外培养要求高,与单层贴壁生长的HepG2细胞相比,HepG2.2.15细胞更容易成团呈多层生长,且消化时不易吹打。HepG2.2.15细胞比HepG2细胞的体积大,HepG2.2.15细胞表面微绒毛消失,细胞器变少,核浆比例变小,核小体增多,细胞内可见病毒包涵体。TNF-α在HepG2.2.15细胞内和HepG2.2.15细胞成瘤组织和肿瘤周围炎细胞内均有表达,但表达量较少。在HepG2细胞及其成瘤组织中的表达较明显,尤其在肿瘤组织周围的炎症细胞中大量表达。IL-6在HepG2.2.15细胞中微量表达,在HepG2细胞中表达略多但并不明显。IL-6在HepG2.2.15细胞成瘤组织和其周围炎细胞中的表达较低,而在HepG2细胞成瘤组织和其周围炎细胞中有较明显的表达。
结论:稳定表达HBV的HepG2.2.15细胞与其不表达HBV的母细胞HepG2相比,生长增殖情况有明显差别,HepG2.2.15细胞成团生长,且HepG2.2.15比HepG2细胞增殖的慢。HepG2.2.15细胞适应期较长,对培养条件要求高。这些形态上的差异影响HepG2.2.15细胞的运动、增殖能力,导致细胞成瘤率降低,并使其成瘤组织分泌的细胞因子TNF-α、IL-6随之减少。HepG2.2.15细胞适于抗HBV药物筛选方面的研究,但HepG2.2.15与HepG2细胞相比,TNF-α、IL-6的表达降低,故在用于抗炎抗肿瘤的相关实验和治疗HCC时宜慎重选择。