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三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)是一种含氯有机溶剂类职业毒物,长年的工业生产不当使TCE的环境污染问题备受关注。EPA和IARC先后将TCE确定为Ⅰ类人类致癌物,肝脏是TCE中毒的主要代谢受损器官,但具体的肝损害机制仍不清楚。课题组前期发现SET(Patient SE translocation,SET)蛋白是TCE致肝损害的关键因子,可介导急性暴露于TCE的肝细胞p53启动子区H3K79me3下调,还可通过抑制HDAC1的表达来促进H2AK9的乙酰化。文献表明癌症的发生与组蛋白修饰异常相关,目前国内外尚未见有关TCE慢性暴露致肝癌中组蛋白修饰与相关基因表达调控的研究。本研究通过建立TCE致肝癌的体内外模型,探索TCE慢性暴露致肝癌中组蛋白修饰水平及相关蛋白的表达变化,为揭示TCE慢性肝毒性作用机制提供科学线索。本研究主要分成以下三个部分:1.TCE慢性暴露诱导B6C3F1小鼠肝癌模型的建立及鉴定方法:分别用低、中、高三个剂量(500、1000及2000mg/kg)的TCE对B6C3F1小鼠进行灌胃染毒,每组40只,每周5次,持续56周,同时设置溶剂对照组和阳性对照组。染毒结束后进行脏器系数、生化指标和病理学分析。结果:小鼠的存活率为90.4%,各组之间无统计学差异(P>0.05)。与溶剂对照组相比,高剂量组的肝脏器系数升高(P<0.05);生化指标中ALT、AST水平均呈剂量效应关系且LDH水平在各个剂量组中均升高(P<0.05);染毒组小鼠肝脏见块型肿块,病理学鉴定为块状型肝细胞癌,其中溶剂对照组、低中高剂量组和阳性对照组的患癌率依次升高,分别为0,5.26%,11.43%,32.43%和62.50%(P<0.001)。结论:TCE慢性暴露诱导B6C3F1小鼠肝癌模型建立成功。2.TCE长期染毒诱导细胞恶性转化模型的建立及初步鉴定方法:人肝细胞(L-02)和SET缺陷的L-02细胞(SET-siRNA)用8 mmol/L的TCE染毒,每周2次,持续26周后进行软琼脂集落形成等试验。结果:与对照组比较,染毒组L-02细胞和SET-siRNA细胞边界模糊、排列紊乱呈重叠生长,其克隆形成率均升高(P<0.01)。结论:TCE染毒26周的L-02细胞和SET-siRNA细胞具有恶性转化趋势。3.TCE致肝癌模型中SET对组蛋白修饰的调控作用方法:提取TCE致肝癌模型中动物肝脏和染毒细胞的总蛋白,用Western blot检测H3K79甲基化与乙酰化、H2AK9ac以及HDAC1等蛋白的表达水平。结果:动物模型中,与对照组比较,中、高剂量组的SET、p53水平升高,H3K79me3的水平降低,HDAC1的水平降低且H2AK9ac水平升高(P<0.05)。细胞模型中,与对照组比较,染毒组L-02细胞H3K79me3水平降低、HDAC1水平降低且H2AK9ac升高而SET-siRNA细胞H3K79me3水平升高、HDAC1水平升高且H2AK9ac水平降低(P<0.05);与L-02细胞比较,染毒组SET-siRNA细胞H3K79me3水平升高、HDAC1水平升高且H2AK9ac的水平降低(P<0.05)。结论:TCE致肝癌中,SET介导了 H3K79me3的下调,同时SET还可能通过抑制HDAC1的表达来促进H2AK9的乙酰化。