【摘 要】
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为提高微生物生产β-葡萄糖苷酶的产量,并将该酶应用于食品增香.该文以无花果曲霉、黑曲霉现成菌株为出发菌,首先通过正交设计试验确定出其原生质体制备与再生的最佳条件,获
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为提高微生物生产β-葡萄糖苷酶的产量,并将该酶应用于食品增香.该文以无花果曲霉、黑曲霉现成菌株为出发菌,首先通过正交设计试验确定出其原生质体制备与再生的最佳条件,获得其原生质体产量分别为3.2×10<7>个/ml、3.0×10<7>个/ml,其原生质体再生率分别达30%、25%以上;并在欧林巴斯相差显微镜下观察和拍摄了黑曲霉原生质体的形成过程.然后采用原生质体紫外线、氯化锂的复合诱变及微生物体细胞的N<+>的多次注入,对供试菌株进行改良,筛得一株β-葡萄糖苷酶酶活较高,遗传性状稳定的高产黑曲霉突变株,产量由出发菌株的9.02U/ml增至17U/ml.进一步经培养基碳源、氮源、无机盐的多项式回归、正交回归分析和产酶促进剂的探讨,确定出最佳培养基配方为麸皮3.0%、(NH<,4>)<,2>SO<,4>0.5%、KH<,2>PO<,4>0.49%、CaCl<,2>0.03%、MgSO<,4>.7H<,2>O 0.03%、FeSO<,4>.7H<,2>O 5mg/l、ZnCl<,2>1.4mg/l、油酸钠0.2%.接着从培养温度、初始pH、通气量、接种形式及接种量等方面优化了菌株的培养条件,最终获得一株酶活比出发菌株提高1.36倍的黑曲霉高产菌株(21.3U/ml).该文还确定了黑曲霉β-葡萄糖苷酶以ρNPG为底物测酶活的测定方法,研究了该酶的酶学性质,发现该酶适于酶性环境,稳定pH(3.0-7.0)范围较广,t<,1/2>为65℃,Km值为1.7×10<-4>mol/L. 最后将黑曲霉β-葡萄糖苷酶应用于果汁、果酒及茶叶制品,经感官鉴评和GC-MS分析,均显示出极好的增香效果和广阔的应用前景.
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