论文部分内容阅读
本文对鸭α-干扰素基因真核表达质粒（pcDNA-SDIFN-α）的重组大肠杆菌大规模中试生产发酵培养条件、pcDNA-SDIFN-α免疫鸭抗0.5 LD50鸭瘟强毒感染进行系统研究，获如下结果：1．pcDNA-SDIFN-α大规模中试生产发酵培养条件：对pcDNA-SDIFN-α的重组大肠杆菌进行发酵培养条件（温度、pH、溶氧浓度、补料速度、接种量、发酵时间和消泡剂添加量）优化，筛选出了适合DH5α菌株生长的最佳发酵条件为：温度37℃，pH7.4，溶氧含量40％，接种量4％，补料速度80ml／h，发酵时间18h，消泡剂添加量0.02％，此条件下，pcDNA-SDIFN-α质粒含量可达到357mg／L。2．pcDNA-SDIFN-α免疫鸭抗0.5 LD50鸭瘟强毒感染：将pcDNA-SDIFN-α分别按每1μg、3μg和6μg三个剂量基因枪轰击和50μg、100μg、200μg三个剂量肌肉注射免疫北京鸭，以PBS、空载体质粒pcDNA 3.1（+）和鸭瘟弱毒疫苗为对照，免疫15 d后分经皮下、滴鼻、口服三个途径人工感染0.5 LD50鸭瘟强毒（含病毒DNA拷贝数为3.524×104），统计发病死亡情况，并于攻毒后2 h、6 h、12 h、24 h、3d、6d、9d、14d、22d、26d、33d和40d采全血，采用实时荧光定量PCR对鸭瘟病毒在鸭外周血中含量的动态变化进行检测。结果：①pcDNA-SDIFN-α基因枪免疫组鸭外周血鸭瘟病毒DNA含量比PBS和空载体对照组低，差异显著（P＜0.05），在3d前都低于弱毒疫苗免疫组，差异不显著（P＞0.05）。三个剂量pcDNA-SDIFN-α免疫组之间外周血鸭瘟病毒DNA含量差异不显著（P＞0.05），攻毒初期（2h），6μg免疫鸭外周血鸭瘟病毒DNA含量最低，3μg次之，1μg最高。基因枪1μg免疫皮下攻毒组有3／9只鸭死亡，滴鼻攻毒组有3／9只鸭死亡；基因枪3μg免疫滴鼻攻毒组有3／9只鸭死亡；PBS和空载体免疫组分别有13／27和10／27只死亡，基因枪6μg免疫鸭以及鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭获得100％保护。病死鸭的脾脏、十二指肠、空肠、盲肠和直肠是鸭瘟病毒DNA含量较高的组织器官。②pcDNA-SDIFN-α肌肉注射免疫组鸭外周血鸭瘟病毒DNA含量比PBS和空载体对照组低，差异显著（P＜0.05），在24h前都低于弱毒疫苗免疫组，差异不显著（P＞0.05），攻毒初期（2h），200μg免疫鸭外周血鸭瘟病毒DNA含量最低，100μg次之，50μg最高。三个剂量pcDNA-SDIFN-α肌肉注射免疫鸭全部存活，PBS和空载体免疫组分别有13／27和10／27只死亡。研究表明，基因枪轰击和肌肉注射pcDNA-SDIFN-α免疫鸭后能产生一定的抗鸭瘟强毒感染的作用，并表现出一定的量效关系。