论文部分内容阅读
第一部分长链非编码RNA LINC01021在食管癌细胞系及食管鳞癌组织中的表达目的:研究长链非编码RNA LINC01021在食管癌细胞系及食管鳞状细胞癌组织(ESCC)中的表达情况,并分析其表达情况与患者临床病理参数之间的关系。方法:应用实时荧光定量反转录多聚核苷酸酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)的方法检测LINC01021基因在五株食管癌细胞系(TE1、TE13、Eca109、Kyse150、Kyse170)以及52例食管鳞癌组织和其相应癌旁正常组织中的表达情况。结果:1.LINC01021基因在食管癌细胞系中的表达情况:LINC01021基因在五株食管癌细胞中均呈高表达状态,并且在Eca109细胞中的表达量最高。2.LINC01021基因在ESCC组织及其癌旁正常组织中的表达情况:LINC01021基因在ESCC组织中的表达明显高于其癌旁正常组织中的表达,并且与TNM分期、分化程度和淋巴结转移都相关(P均<0.05),但与性别和年龄无关(P均>0.05)。第二部分长链非编码RNA LINC01021对食管癌细胞生物学行为的影响目的:研究敲低长链非编码RNA LINC01021后,对食管癌细胞体外增殖、迁移、侵袭能力和细胞周期的影响及其相关作用机制。方法:1设计合成特异性敲低LINC01021的shRNA,通过细胞转染的方法构建敲低LINC01021基因的食管癌细胞Eca109,并通过RT-qPCR的方法检测转染效率。2应用MTS、克隆形成实验检测敲低LINC01021基因后对食管癌细胞增殖能力的影响。3应用划痕实验检测敲低LINC01021基因后对食管癌细胞迁移能力的影响。4应用Transwell小室侵袭实验检测敲低LINC01021基因后对食管癌细胞侵袭能力的影响。5应用流式细胞术检测敲低LINC01021基因后对食管癌细胞周期的影响。6应用实时荧光定量反转录多聚核苷酸酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)的方法检测敲低LINC01021基因对食管癌细胞EMT相关基因(E-cadherin、Vimentin、Snai1、Twist1以及ZEB1)表达水平的影响。结果:1.LINC01021shRNA质粒的筛选与敲低效率的验证:成功构建敲低LINC01021基因的Eca109细胞,应用RT-qPCR的方法分析结果显示,Eca109细胞转染组中LINC01021基因的相对表达量显著低于对照组,且LINC01021sh4转染组LINC01021基因的相对表达量最低,敲低效率最高,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.敲低LINC01021基因后对食管癌细胞增殖能力的影响:MTS和克隆形成实验结果显示,敲低LINC01021基因能够抑制Eca109细胞的增殖活性(P<0.05)。3.敲低LINC01021基因后对食管癌细胞迁移能力的影响:划痕实验结果显示,敲低LINC01021基因能够抑制Eca109细胞的迁移能力(P<0.05)。4.敲低LINC01021基因后对食管癌细胞侵袭能力的影响:Transwell小室侵袭实验结果显示,敲低LINC01021基因能够抑制Eca109细胞的侵袭能力(P<0.05)。5.敲低LINC01021基因后对食管癌细胞周期的影响:流式细胞学分析结果显示,敲低LINC01021基因后Eca109细胞在S期和G2/M期的比例增高,该基因可以使细胞周期阻滞于S期和G2/M期从而影响细胞增殖。6.敲低LINC01021基因后对EMT相关基因表达的影响:RT-q PCR分析结果显示,敲低LINC01021基因能够显著上调E-cadherin的mRNA表达(P<0.05),下调Eca109细胞Vimentin、Snai1、Twist1和ZEB1的mRNA表达(P<0.05)。结论:1.LINC01021基因在ESCC组织和食管癌细胞系中的高表达可能与食管鳞状细胞癌的发生、发展相关。2.LINC01021基因可以影响食管癌细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力,并且通过调节细胞周期从而影响食管癌细胞的增殖,LINC01021基因对食管癌细胞生物学行为的影响可能与EMT这一生物学过程相关。