【摘 要】
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血管内皮生长因子(VEGF)是一种分子量为34-42 kDa的、由两个相同多肽链通过二硫键构成的同源二聚体糖蛋白,是一种重要的促血管生成因子。VEGF在许多种类的细胞中都有表达,在
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血管内皮生长因子(VEGF)是一种分子量为34-42 kDa的、由两个相同多肽链通过二硫键构成的同源二聚体糖蛋白,是一种重要的促血管生成因子。VEGF在许多种类的细胞中都有表达,在肿瘤细胞的表达尤为显著。VEGF作为一种特异的有丝分裂原,可以促进内皮细胞的迁移和增殖,诱导肿瘤的新生血管生成,在肿瘤的生长、转移过程中发挥了重要作用。提示基于VEGF肿瘤辅助诊断试剂的研制具有可行性。本研究构建了带有6个His标签的VEGF原核表达质粒,将重组质粒转入大肠杆菌中,VEGF蛋白以包涵体的形式表达。使用Ni离子亲和层析方法对蛋白进行了纯化,并利用纯化后的蛋白免疫家兔,获得了抗血清,抗体效价达到1:25600。使用Protein G亲和纯化方法纯化了抗血清,利用纯化后的VEGF多克隆抗体和单克隆抗体,初步建立了检测血清VEGF的夹心ELISA方法。并用该方法对25名健康人和33名肿瘤患者的血清VEGF含量进行了检测。结果发现,肿瘤患者血清中的VEGF含量(平均为407pg/ml)高于健康人(未检测到),二者差异显著(P<0.05)。本研究利用基因工程手段,制备了人重组VEGF165蛋白和多克隆抗体,初步建立了基于双抗体夹心ELISA的VEGF血清学检测方法并应用于临床血清检测,为开发基于VEGF肿瘤辅助诊断试剂奠定了基础。
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