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背景及目的:肺癌是目前全球恶性肿瘤累及死亡的首要原因,发病率高,临床缺乏有效治疗手段,死亡率高,是严重危害人群健康的一大难题。深入研究肺癌细胞恶性生长的维持和促进因素,对理解肺癌发病机制和研发临床治疗新策略有重要意义。研究表明,多种微小RNA(microRNA,miRNA)在肺癌组织中表达异常,并且参加肺癌细胞生物学功能的调控,其表达水平和肺癌的发生发展密切相关。本课题以肺腺癌为研究对象,观察微小RNA(miRNA,miR)-27a-3p在肺腺癌组织和正常组织中的表达水平,旨在探讨肺腺癌中mi R-27a-3p的表达水平,并探讨miR-27a-3p表达水平对肺腺癌细胞的增殖和迁移能力的影响。方法:1.在青岛大学附属医院胸外科选取21例肺腺癌患者癌组织和癌旁组织(距肿瘤5cm以上),选取的患者术前均未进行放化疗,并且术后病理诊断确诊为肺浸润性腺癌。切除的新鲜组织离体后于半个小时内放置于-80℃超低温冰箱内冻存。2.用Trizol法提取肺腺癌癌组织和癌旁组织内的总RNA,通过实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测癌组织和癌旁组织内miR-27a-3p的表达水平。3.购买miR-27a-3p模拟试剂和抑制试剂,将模拟剂和抑制剂通过转染使其改变肺腺癌A549细胞中mi R-27a-3p的表达水平。通过RT-qPCR检测A549细胞转染后miR-27a-3p的表达水平来验证转染效果。4.成功构建miR-27a-3p过表达A549细胞株和miR-27a-3p低表达A549细胞株以及其相应对照细胞后,通过MTT实验检测转染后的A549细胞的增殖能力的改变,验证miR-27a-3p表达水平的改变对肺癌细胞增殖能力的影响。5.成功构建miR-27a-3p过表达A549细胞株和miR-27a-3p低表达A549细胞株以及其相应对照细胞后,通过细胞划痕实验检测转染后的A549细胞的迁移能力的改变,验证miR-27a-3p表达水平的改变对肺癌细胞迁移能力的影响。结果:1.收集了行根治性或姑息性切除术的21例肺腺癌患者原发病灶组织及癌旁组织(距离癌组织5 cm以上)。通过RT-qPCR检测癌组织和癌旁组织中miR-27a-3p的表达水平,结果证实,在与癌旁组织比较,miR-27a-3p在肺腺癌组织中的表达水平显著上升(P<0.01)。2.通过转染miR-27a-3p mimics成功构建miR-27a-3p过表达A549细胞株,RT-qPCR实验结果表明与对照组相比转染组细胞miR-27a-3p表达明显升高。与此同时,通过转染miR-27a-3p inhibitor成功构建miR-27a-3p沉默A549细胞株,RT-qPCR实验结果表明与对照组相比转染组细胞miR-27a-3p表达明显降低。3.用构建成功的miR-27a-3p过表达和沉默A549细胞株进行细胞增殖实验观察miR-27a-3p表达水平对细胞增殖能力的影响。结果表明,A549细胞转染24 h、48 h、72 h、96 h后,过表达miR-27a-3p后的A549细胞增殖能力显著高于对照组(P<0.05),而沉默miR-27a-3p的表达后A549细胞的增殖能力显著低于对照组(P<0.05)。4.用构建成功的miR-27a-3p过表达和沉默A549细胞株进行细胞划痕实验观察miR-27a-3p表达水平对细胞迁移能力的影响。细胞划痕实验结果显示,过表达miR-27a-3p后A549细胞的迁移能力较对照组细胞显著提高(P<0.05),而沉默miR-27a-3p的表达后A549细胞的迁移能力较对照组细胞显著降低(P<0.05)。结论:本研究结果显示,与癌旁正常组织相比,肺腺癌组织中的mi R-27a-3p表达水平显著增高,这提示miR-27a-3p表达异常增强可能是在肺腺癌的发生发展中起一定促进作用。肺腺癌细胞功能实验结果证实,miR-27a-3p表达水平升高可明显促进肺腺癌细胞的增殖和迁移能力,相反抑制肺腺癌细胞中miR-27a-3p的表达则明显降低了细胞的增殖和迁移能力。这表明,miR-27a-3p表达水平与肺腺癌细胞的增殖和迁移能力有关且成正相关,而肿瘤细胞的增殖和迁移能力与其生长和侵袭能力即肿瘤细胞恶性程度密切相关,因此本研究结果提示miR-27a-3p是在肺腺癌发生发展其促进作用的癌基因,其在肺腺癌中异常高表达并促进肿瘤细胞的生长和转移,参与调节肺腺癌细胞的生物学行为。