转基因拟南芥雄性不育系的创制及Cre/loxP重组定位系统在雄性不育中的应用

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在本实验室前期的研究工作中发现,在拟南芥雄蕊中特异性下调乙烯受体ETR1表达水平能够改变花器官中乙烯信号途径并对拟南芥雄蕊的发育产生剧烈的影响,导致拟南芥中出现雄性不育性状。在该研究工作的基础上,我们计划利用该机制创建新型转基因拟南芥工程不育系;同时为了实现将这种雄性不育性状应用于杂交制种的技术体系的目的,我们利用Cre/loxP位点特异性重组系统所具有的重组删除特性构建对应的转基因拟南芥恢复系,特异删除转基因拟南芥不育系与恢复系杂交F1代中的能够导致雄性不育性状发生的DNA片段以达到恢复F1代育性的目的。   通过在野生型拟南芥中转入两端带有loxP位点的器官特异性启动子AP3介导的反义ETR1载体来构建转基因拟南芥不育系,对其花器官形态进行观察、花粉亚历山大染色镜检和花粉萌发实验可以发现转基因拟南芥的花丝明显缩短、花药萎缩、可育花粉大量减少、花粉无法正常萌发、植株出现严重的雄性不育性状。将带有35s启动子介导Cre基因的转基因植株作为对应的恢复系,两者在开花后杂交获得F1代,位于F1代植株两个同向loxP位点之间的不育基因表达盒被Cre重组酶识别删除,从而恢复F1代育性。   该研究工作将前期基础研究的发现转换为应用领域具有源头创新性的新思路和新方法,为发掘杂种优势应用潜力和今后的精确育种积累了新的经验。
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