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近年来，猫作为一种宠物在我国发展十分迅速，其种类和数量越来越多，但疾病尤其是病毒病严重危害着猫的健康。为推进猫基因工程重组干扰素的研究，本文克隆并表达了猫干扰素-ω(FeIFN-ω)基因，并进一步研究了重组FeIFN-ω(rFeIFN-ω)在猫肾上皮细胞(CRFK)上的生物学活性，为重组猫ω干扰素的制备和应用奠定了基础。
以从猫脾中提取的总RNA为模板，通过RT-PCR的方法克隆扩增出FeIFN-ω基因，将扩增的PCR产物纯化回收后，插入pGEM-TEasyVector克隆载体并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，以含氨苄青酶素(Amp)的LB平板筛选阳性克隆并对阳性重组子进行酶切鉴定，测序。然后根据原核表达载体pET-His设计含BamHⅠ和NheⅠ酶切位点的引物，以FeIFN-ω基因为模板，通过PCR的方法扩增出FeIFN-ω成熟肽基因。将空表达载体pET-His进行BamHⅠ和NheⅠ双酶切，然后将扩增的FeIFN-ω成熟肽基因克隆于原核表达载体pET-His。将重组表达载体质粒转入大肠杆菌Rosetta进行诱导表达。重组蛋白包涵体经离心收集、超声破碎、变性、洗涤、溶解、纯化和复性后获得纯化的具有活性的rFeIFN-ω。用细胞病变抑制法(CPEI50)测定rFeIFN-ω在猫肾上皮细胞系CRFK/VSV的抗病毒活性。
结果显示FeIFN-ω基因全长591bp，编码196个氨基酸序列，其中1-23位氨基酸为信号肽区，24-196位氨基酸为成熟蛋白区。FeIFN-ω成熟肽基因全长519bp，编码173个氨基酸。表达产物经SDS-PAGE分析，证明目的蛋白以包涵体的形式存在，大小约为20kDa，在大肠杆菌中的蛋白表达量达到28％。测出rFeIFN-ω具有较高的抗病毒作用，生物学活性达到1.64×106IU/mg，重组蛋白质的含量约为18mg/L。