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目的：旨在利用人脑缺血脑组织标本和大鼠大脑中动脉栓塞模型(middle cerebral artery occlusion,MCAO),探讨自然杀伤细胞(Nature Killer cell,NK)是否参与脑缺血损伤过程,假如NK细胞参与此病理过程,它是以何种方式发挥作用。
方法：
1、根据病程时间将人脑梗塞患者脑组织切片分为梗塞<2d组、2-5d组和>5d组,免疫组化法检测其NK细胞的浸润情况：
2、线栓法建立大鼠脑缺血模型；按脑缺血时间分1h、6h、12h、24h、2d、6d六组；
3、大鼠脑切片应用免疫组化检测NK细胞浸润情况,利用免疫双染激光共聚焦技术检测NK细胞分泌IFN-γ情况；
4、人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞传代培养,按照干预因素不同,将其分为正常培养组、正常培养+IFN-γ、厌氧培养组、厌氧培养+IFN-γ组；
5、观察SH-SY5Y细胞形态变化,利用台盘兰染色检测在缺氧状态下,IFN-γ对SH-SY5Y细胞活性的影响。
结果：人脑缺血侧NK细胞数高于非缺血侧,缺血<2d组增高2.14倍(P<0.01),缺血2-5d组增高2.75倍(P<0.01),缺血>5d组增高2.41倍(p<0.05);大鼠脑缺血后,缺血侧脑组织中NK细胞浸润从1h就已增高,到第6d浸润NK细胞数量达到峰值,与缺血对侧相比,缺血后1h NK细胞数是缺血对侧的5.27倍(P<0.05),6h为3.14倍(P<0.01),12h为3.09倍(P<0.001),24h为3.89倍(P<0.01),48h是3.69倍(P<0.05),到第6d,比缺血对侧高3.89倍(P<0.01)。大鼠脑组织免疫荧光双染色发现,缺血侧大部分NK细胞表达IFN-γ,细胞呈双阳性显色,与非缺血侧相比P值分别为:P6h<0.05、P12h<0.05、P2d<0.01。SH-SY5Y细胞加入IFN-γ厌氧培养发现,细胞形态有明显改变,加入IFN-γ厌氧培养组与单纯厌氧培养组相比细胞死亡率升高,P<0.05。
结论：
1、脑缺血发生之后,有大量外周NK细胞通过血脑屏障浸润到缺血脑组织内,参与了脑缺血病理过程。
2、浸润到缺血脑组织的大部分NK细胞表达IFN-γ,NK细胞处于活化状态。
3、IFN-γ可以促进神经细胞死亡。