论文部分内容阅读
河豚鱼(Takifugu rubripes)营养丰富,是一种很有经济价值的鱼类。其鱼皮中富含胶原蛋白,是制备生物活性肽的良好原料。本课题采用热水法提取河豚鱼皮中的胶原蛋白。选择酶解能力最强的木瓜蛋白酶酶解胶原蛋白获取胶原蛋白肽。通过单因素实验和正交实验,以酶解产物的多肽得率和羟自由基清除活性为指标,确定最佳酶解条件。在最佳条件下提取的胶原蛋白肽通过超滤技术分离成不同分子量范围的三个组分：3～10kDa、1～3kDa、1kDa以下。采用Fenton体系,DPPH体系,邻苯三酚自氧化体系和还原体系评价各个组分抗氧化活性。将抗氧化活性较高的组分采用离子交换层析、凝胶过滤层析和高效液相色谱分离纯化,制备抗氧化胶原蛋白肽。实验结果表明,河豚鱼皮胶原蛋白肽的最佳提取酶是木瓜蛋白酶,最佳酶解条件为：温度45℃,时间2h,酶加量5000U/g, pH6.5,底物浓度33.6mg/100mL。在此条件下,水解产物的多肽得率为34.76%,羟自由基清除率为67.54%。不同分子量范围的三个河豚鱼皮胶原蛋白肽组分均具有较强的抗氧化活性,其清除羟基自由的能力最强,清除DPPH的能力次之,清除超氧阴离子的能力和还原能力相对较差,并且分子量越小其抗氧化能力越强。分子量在1～3kDa范围内的河豚鱼皮胶原蛋白肽组分经DEAE Sepharose CL-6B阴离子交换柱分离后得到组分A和B；组分A和B分别经过Sephadex G-25凝胶过滤柱分离后得到组分A-Ⅰ、A-Ⅱ和B-1、B-Ⅱ;组分A-Ⅱ和B-Ⅱ经HPLC分离后分别得到6个和5个纯化肽。实验结果表明,河豚鱼皮胶原蛋白肽经分离纯化后,其抗氧化活性降低,且分离产物的分子量越小其抗氧化能力越强。