【摘 要】
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多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(polygalacturonase inhibiting protein, PGIP)是一种特异性蛋白,能够非竞争性地抑制病原菌的内切多聚半乳糖醛酸酶(endo polygalacturonase, endo
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多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(polygalacturonase inhibiting protein, PGIP)是一种特异性蛋白,能够非竞争性地抑制病原菌的内切多聚半乳糖醛酸酶(endo polygalacturonase, endo-PG)活性,增强植物的抗病性。研究发现多种植物体内含有PGIP基因,这类基因承受了较小的进化压力,进化速率较快,致使有些植物如禾谷类作物的PGIP基因已经丢失,而多数茄科类作物留了这类基因。本研究主要是将PGIP基因转入到禾本科作物小麦和玉米基因组中,以期获得转PGIP基因的小麦玉米植株,从而能对真菌病害如小麦赤霉病、玉米纹枯、玉米大小斑病等产生抗性。本研究的主要结果和结论如下：1、植物表达载体pCBUPGIP构建将克隆出的PGIP基因和含有Bar基因的pCAMBIA-Bar-Ubi载体双酶切后用T4连接酶连接构建植物表达载体pCBUPGIP,并用PCR鉴定。成功构建载体后转入大肠杆菌进行扩大培养提取质粒,纯化后,测定浓度并稀释至1.0ug/L用于基因枪法转化小麦同时采用液氮冻融法将载体转入根癌农杆菌LBA4404,转化玉米。2、转基因小麦玉米利质材料的获得通过优化小麦玉米再生体系,建立了高效再生体系,并成功获得小麦品种扬麦158的转化再生株、玉米自交系A188和齐319的转化再生株。提取转化株的总DNA,用PGIP两端的引物扩增DNA样品,均得到了660bp的目的片段。3、转化株进行真菌病害抗病性初步鉴定对小麦转化品种扬麦158进行小麦赤霉病的抗性鉴定,结果显示转基因小麦表现出抗性；对玉米转化品种A188进行了玉米纹枯病、玉米大小斑病的抗性鉴定,结果显示转基因玉米表现出抗性。
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