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目的:牙龈癌是口腔颌面部常见的恶性肿瘤。正常细胞的增殖分化在体内生长因子、激素及环境等多种信号的调控影响下是一个严格控制和高度稳定的过程。肿瘤的形成是细胞无限增殖的结果。因此,探讨体内影响牙龈癌形成的有关因素,对阐明牙龈癌的发生发展机制及其有效的防治都具有重要的意义。
人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin,hCG)是由胎盘所分泌的糖蛋白激素。与靶细胞膜上的受体结合,主要通过腺苷酸环化酶系统刺激甾体类激素的生成,从而对性细胞成熟、受精卵着床及妊娠的维持等生理过程起重要的调节作用。近年来有研究表明,人绒毛膜促性腺激素(hCG)α、β两亚基在非生殖系统恶性肿瘤中存在表达,且hCG亚基可能与多种肿瘤的发生、发展有关。α亚单位为hCG非特异的组分,难以作为肿瘤的标记物,其主要与激素的信号转导有关。β亚基主要和激素与受体的结合有关,且与恶性肿瘤自我生长的调控功能、肿瘤的转移特性和分化程度、以及与肿瘤微环境和免疫耐受的形成等都具有密切关系。为探讨牙龈癌中hCGβ亚基的表达,我们采用免疫组化方法检测hCGβ基在牙龈癌变中的表达情况。
方法:选取存档的46例牙龈癌和22例正常牙龈组织蜡块,分为试验组和对照组。将每个蜡块切为4-5μm的切片,共切3张,1张HE染色,1张作为阴性对照,其余1张行β-hCG染色。方法如下:石蜡切片常规脱蜡至水;5%H<,2>O<,2>甲醇振洗25分钟,以封闭内源性过氧化物酶活性;微波抗原修复,92-98℃×15分钟,室温冷却;正常山羊血清封闭,37℃孵育30分钟;倾去血清,滴加一抗,4℃过夜;滴加生物素化二抗,37℃孵育25分钟;滴加辣根酶标记的链酶卵白素,37℃孵育20分钟;最后DAB显色,苏木素复染,脱水、透明、封片。除血清封闭步骤外,以上各步后均以PBS振洗5分钟×3次。用已知β-HCG阳性的绒癌切片做为阳性对照;以PBS代替一抗作为阴性对照。以细胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性细胞,以组织中无明显阳性反应细胞为阴性。结果评定参照Lorenzolo muzio标准,每个视野计数100个细胞,观察阳性细胞数。计数10个高倍视野中阳性细胞的百分比,依此将阳性表达又分为:弱阳性(+),阳性细胞数<10%;阳性(++),阳性细胞数为10%~50%:强阳性(+++),阳性细胞数>50%。
用SPSS 11.5统计软件进行统计分析,免疫组化结果用X<2>检验,出现小值频数时,采用Fisher精确概率法。应用Spearman等级相关对β-hCG表达情况的相关性进行分析,P<0.05有统计学意义。
结果:1.在正常牙龈组织中,β-hCG未见表达。在牙龈癌组织中,β-hCG的阳性染色主要位于细胞的胞浆内,呈棕黄色颗粒染色。β-hCG在正常牙龈组织中的表达率为0,在试验组的表达率为67.39%,与对照组相比,试验组的阳性率明显增高,二者的阳性表达率之间有显著性差异(P<0.05)。
2.β-hCG的表达与肿瘤的分化程度相关,分化程度越低,β-hCG的表达越明显(P<0.05),而与患者的性别、年龄无明显的相关性(P>0.05)。
结论:1.在正常牙龈组织中没有β-hCG的表达。在牙龈癌组织中可见β-hCG的表达。且在牙龈癌组织中β-hCG的表达明显增高。表明β-hCG在牙龈癌的发生发展中发挥一定的作用。
2.在牙龈癌组织中,β-hCG的表达增高与牙龈癌的分化程度有关,分化程度越低则β-hCG的表达越明显。与患者的年龄、性别无关。