【摘 要】
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目的:探讨构建组织工程化生物角膜更有效、更方便的方法。方法1.以组织块培养法、酶消化法扩增的角膜缘干细胞为种子细胞,以去上皮羊膜、板层角膜切削刀制作的异种角膜基质和高
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目的:探讨构建组织工程化生物角膜更有效、更方便的方法。方法1.以组织块培养法、酶消化法扩增的角膜缘干细胞为种子细胞,以去上皮羊膜、板层角膜切削刀制作的异种角膜基质和高分子材料PET为载体,利用细胞培养池体外构建板层角膜组织,通过HE染色、扫描电镜、透射电镜等观察构建组织的形态结构,检验细胞培养池条件下进行构建板层生物角膜的可能性;2.以组织块培养法扩增的角膜缘干细胞为种子细胞,以高分子材料PET为载体,利用细胞培养池、灌注培养系统、旋转培养系统体外构建板层生物角膜,并通过HE染色、Hoechst33342、Propidiumiodide荧光染色、扫描电镜、透射电镜等观察所构建组织的细胞排列方式与形态结构;免疫组化、RT-PCR检测所构建组织的p63及K3/K12表达;pH计测定三种培养系统培养液pH值的变化,比较三种构建方法的条件稳定性、及所构建组织的差别。结论:1.原代或早代细胞较适合选作种子细胞,用于角膜组织构建,组织块培养法比酶消化法扩增角膜缘干细胞的效率更高;2.去上皮羊膜、MLK刀制作的板层角膜基质、PET膜适合作为构建角膜的载体;3.细胞培养池具有透明的PET膜,多孔的结构保证营养物质自由通过,在构建角膜组织时可以较好地模拟体内微环境;4.细胞培养池、灌注培养系统、旋转培养系统三种方法均可构建出健康的复层角膜上皮组织,构建组织K3/K12的mRNA、蛋白质表达差别不大,但是细胞排列方式,细胞与载体结合的紧密程度存在差别;5.灌注培养、旋转培养过程中切应力对于构建组织的细胞骨架的影响,构建过程中细胞外基质分泌、基因表达的变化以及构建组织对于损伤应答的分子机制等都有待于进一步研究,构建组织的功能需要通过动物移植实验检测。
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