【摘 要】
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本文以拟南芥为材料克隆了CBF2基因和启动子Rd29A,构建了适合水稻转化的表达载体,通过农杆菌介导法将其转化水稻愈伤组织,潮霉素抗性筛选出转基因植株,主要研究结果如下:
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本文以拟南芥为材料克隆了CBF2基因和启动子Rd29A,构建了适合水稻转化的表达载体,通过农杆菌介导法将其转化水稻愈伤组织,潮霉素抗性筛选出转基因植株,主要研究结果如下:
1、通过PCR技术克隆了CBF2基因全长cDNA,测定序列全长725bp,该序列包含651bp阅读框,编码216个氨基酸,与GeneBank中CBF2序列比对,核苷酸序列的同源性为99.8％。
2、利用PCR技术从拟南芥总DNA中克隆出逆境诱导型启动子Rd29A,测序结果显示该启动子全长956bp,与GenBank中Rd29A序列比对,其核苷酸同源性达99.5％。
3、通过酶切、电泳、目的片段的回收及连接等过程,将CBF2基因和启动子Rd29A克隆到双元表达载体pCAMBIA1301上,成功构建了pCAMBIA1301-Rd29A-CBF2表达载体,为通过基因工程提高水稻的抗性提供了材料。
4、通过农杆菌介导法将植物表达载体pCAMBIA1301-Rd29A-CBF2导入根癌农杆菌EHA105,PCR筛选出阳性克隆,并转化入水稻胚性愈伤中,经由潮霉素筛选,目前获得了5株转基因植株。
CBF2转基因水稻植株的获得为通过基因工程改良植物抗逆性提供了材料和理论基础,并为提高作物产量提供了依据。
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