南美白对虾生态综合养殖池塘底泥细菌群落结构及功能多样性研究

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本实验在我国浙江省宁波市咸淡水南美白对虾生态综合养殖场进行。该地区的对虾养殖技术较成熟,形成了规模化、规范化、集中化的经营管理模式。且养殖模式多样,以综合养殖为主,生态健康的养殖方式已经成为该地区今后的主导方向。本实验在全面分析南美白对虾池塘底质波动状况的基础上,结合平板菌落计数法和16S rDNA序列分析等方法,监测了底泥中细菌数量的周期性动态变化,并进一步对底泥细菌种类进行鉴定,分析其群落结构组成。模拟底泥环境细菌种群构成,采用MPN试管法对相关生理类群细菌特征进行分析,探讨细菌细菌在底泥生态系统生源要素循环中的作用,以及优势生理类群对底质环境的指示作用,为开发有益菌和南美白对虾的健康养殖提供理论指导。主要研究结果如下:1.于2011年5月至10月,在浙江省宁波市选择了6个南美白对虾综合养殖池塘,采集底泥测定有机质含量、总氮、总磷等理化性质,并进一步采用对硝基苯磷酸二钠(p-NPP)法和荧光素双醋酸酯法,检测碱性磷酸酶活性(APA)、微生物活性(FDA)等指标,在此基础上分析和探讨环境因子和微生物酶活性的关系,结果表明:APA和FDA、总氮和APA均有极显著的正相关性(ɑ=0.01);总磷和FDA表现出显著的正相关性(ɑ=0.05);底泥有机质含量、总磷和总氮三者之间未呈现显著相关性。从结果来看,养殖系统中底泥的理化性质和微生物酶活性间有极大的关联,然而纯粹的环境因子分析,在本实验中没有表现出很大的研究价值。可见,说明通过结合微生物因子才能获得比较可靠、合理的推测和结果。另外,APA和FDA有显著相关性,APA在一定程度上可以较准确的指示底泥细菌的状况,作为养殖系统底质有机污染的综合检测指标。2.于2012年5月至9月,在浙江省宁波市南美白对虾综合养殖场进行实验。采用平板菌落培养计数和16S rDNA序列分析等方法,对底泥细菌、环境因子在整个养殖周期的动态变化进行研究,并在此基础上进一步对底泥细菌进行分离、纯化和鉴定,分析其群落结构组成,探究底泥生态系统细菌多样性。结果显示:(1)底泥中异养菌数量在8月初达到峰值,波动范围为(45±2.3)×105—(110±5.9)×105cfu/g之间,芽孢杆菌数量变动范围为(50±11.2)×104—(106±5.8)×104cfu/g之间,弧菌总数波动幅度为0—(23±2.7)×103cfu/g之间,峰值均出现在7月份。(2)底泥中有机质与总磷有极显著的负相关性(ɑ=0.01),但有机质与异养菌数则呈显著正相关性,总磷和异养菌数也呈现显著负相关;芽孢杆菌数量与弧菌数量之间表现出了显著的正相关性。(3)在单养模式中,底泥细菌优势属依次为芽孢杆菌属、弧菌属和葡萄球菌属;混养模式则为芽孢杆菌属、弧菌属和假单胞菌属。芽孢杆菌属在单养和混养模式中的均占据主导地位,其所占比例分别为46.6%和51.5%。对底泥中的异养菌组成进行Shannon—Wiener多样性指数比较,结果表明混养池塘底泥异养菌多样性指数较高。3.通过对相关生理类群细菌及优势生理类群和种群的研究,探讨细菌在底泥生态系统C、N和P循环中的作用。结果表明,在碳素方面:底泥环境中代谢淀粉和明胶蛋白的细菌数量较多,同时种群结构也比较丰富。氮素方面:在种群丰度上硝酸盐还原菌极多,其次是硝化和氨化细菌,反硝化细菌不多,亚硝酸还原菌极少;在数量上则是氨化细菌最多,其次才是硝酸盐还原菌。磷素方面:细菌中具磷酸酯酶、分解卵磷脂的能力明显强于转化Ca3(PO4)2的能力,从总体上看,其细菌类群数量和种群丰度低,底泥中细菌对磷的代谢能力普遍不强。
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