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目的：血红蛋白是临床常用检测指标，其检测方法多种多样，不同方法的检测结果必须溯源至血红蛋白参考方法才能保证检测结果的准确性。国际血液学标准化委员会(ICSH)于1967年确定了血红蛋白的参考方法，至今该方法已修订三次，仪器、试剂、操作程序等都有改变，本实验室按照ICSH的要求建立了血红蛋白测定的参考方法，为了验证血红蛋白参考方法用于标准物质定值的可行性，我们对血红蛋白测定参考方法的性能进行了评价。氰化高铁血红蛋白(HiCN)标准物质对于检测结果的量值传递有重要意义，许多国家和组织都制备了各自的标准物质，如欧盟标准署(BCR)制备了HiCN标准物质CRM 522。文献检索表明，国内尚无HiCN一级标准物质，虽然有经计量部门批准的HiCN二级标准物质，但目前研制部门均已不生产。为了解决使用HiCN进行溯源的问题，我们按照《一级标准物质技术规范》的要求研制了HiCN候选标准物质。方法：确认分光光度计的性能可满足血红蛋白参考方法的要求，确定参考测量程序；参照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)文件EP6-P2和EP5-A评价该方法的线性和精密度，通过测定WHO国际标准物质验证我室血红蛋白参考方法测量结果的准确性。参考ICSH国际标准物质的制备方法制备HiCN候选标准物质300瓶；按照ISO Guide35的要求评价候选标准物质的均匀性、稳定性，在均匀性、稳定性合乎要求的前提下由多个实验室使用多台经过严格校准的仪器为HiCN候选标准物质定值。结果：在测量范围内参考方法精密度评价结果：变异系数变化范围0.12～0.32％；在血红蛋白浓度70～270 g/L范围内，参考方法的测定值与预期值的线性相关系数为1.000，斜率为1.001；用U-3000和U-3310型分光光度计测定WHO国际标准物质的结果与定值的相对偏差分别为—0.01％和—0.35％。按照ISO Guide35计算HiCN候选标准物质均匀性的不确定度为0.0004 g/L，CV为0.09％(WHO国际标准物质均匀性检测结果的CV为0.09％)；当效期为1年时，长期稳定性的不确定度为0.0006 g/L；HiCN定值结果为0.6159 g/L(相当于251倍稀释的新鲜血血红蛋白浓度为154.7 g/L)，不确定度为0.0004 g/L；当扩展因子取2时，候选标准物质的扩展不确定度为0.0018 g/L；如果按照WHO的HiCN国际标准物质的定值不确定度计算方法，候选标准物质的不确定度为0.0012 g/L(WHO国际标准物质的不确定度为0.0013 g/L)。结论：参考方法检测结果的精密度(CV)符合NCCLS H15-A3的要求(＜0.5％)；在血红蛋白浓度范围内(70～270g／L)，血红蛋白参考方法的测定值与预期值呈线性；测定WHO国际标准物质的结果在国际标准物质的定值允许范围内。结果表明，HiCN候选标准物质均匀性、稳定性良好；定值为0.6159±0.0018g／L。