【摘 要】
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目的构建EGFP-HIF-1α反义重组质粒,转染人宫颈癌Hela细胞,用以探讨HIF-1α蛋白在宫颈癌的生长、转移中的作用。方法应用基因重组技术构建EGFP-HIF-1α反义重组质粒,通过脂质
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目的构建EGFP-HIF-1α反义重组质粒,转染人宫颈癌Hela细胞,用以探讨HIF-1α蛋白在宫颈癌的生长、转移中的作用。方法应用基因重组技术构建EGFP-HIF-1α反义重组质粒,通过脂质体介导将其转染入Hela细胞,倒置荧光显微镜观察转染效果,Western blot检测HIF-1α蛋白的表达。结果酶切鉴定结果显示含EGFP-HIF-1α反义重组质粒构建成功,并能在Hela细胞中封闭HIF-1α蛋白的表达。结论EGFP-HIF-1α反义重组质粒构建及转染成功,封闭Hela细胞中HIF-1α蛋白的表达,为进一步研究HIF-1α蛋白在宫颈癌的生长、转移中的作用提供试验基础。目的:探讨拓扑替康(TPT)对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP的杀伤和诱导凋亡活性及其作用机制。方法: MTT比色法与软琼脂克隆形成测定TPT对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP的杀伤效应;TUNEL法和流式细胞仪研究TPT对靶细胞的凋亡诱导作用;Western blot检测TPT对COC1/DDP细胞内bcl-2、bax和caspase-3基因表达的影响以及caspase-3活性的改变。结果: TPT对COC1/DDP细胞有明显细胞毒性作用,不仅有剂量依赖性,也存在明显的时间依赖性;COC1/DDP细胞在TPT作用后出现特征性凋亡形态特征,且凋亡率由8.54%上升为23.16%(P﹤0.05)。TPT不影响COC1/DDP细胞内bcl-2蛋白表达,却明显增加bax蛋白和caspase-3蛋白表达,并提高caspase-3活性。结论: TPT对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP有明显的杀伤和促凋亡作用,其机制可能依赖于细胞内bax蛋白表达增高和caspase-3的活化。
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