【摘 要】
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Itoh等人研究发现，在ColE2质粒的origin下游存在一个长约84 bp的DNA片段，它能明显增强ColE2 DNA的复制，并将此DNA片段称为增强子Ⅱ—enhancer Ⅱ。他们认为enhancer Ⅱ可能是通
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Itoh等人研究发现，在ColE2质粒的origin下游存在一个长约84 bp的DNA片段，它能明显增强ColE2 DNA的复制，并将此DNA片段称为增强子Ⅱ—enhancer Ⅱ。他们认为enhancer Ⅱ可能是通过增强ColE2 origin与Rep蛋白的结合，或使Rep蛋白更易脱落并被DNA聚合酶Ⅰ取代从而使ColE2 DNA的复制效率提高。为了研究增强ColE2质粒复制的enhancer Ⅱ片段的作用机理，本研究构建了重组质粒pBluescript-ColE2 ori-enhancer Ⅱ。首先根据目的片段的序列设计一对两端分别带有Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点的PCR引物，并以pEC22为模板扩增出含ColE2 ori-enhancer Ⅱ的DNA目的片段。接着将经双酶切的目的片断克隆到载体pBluescript Ⅱ SK+中。经限制性酶切分析、PCR鉴定初步筛选出阳性重组质粒。再进行DNA测序，从而成功获得重组质粒pBluescript-ColE2 ori-enhancer Ⅱ。最后根据质粒不相容原理进行了活性初步测定，结果表明enhancer Ⅱ可能是通过增强ColE2 origin与Rep蛋白的结合来增强ColE2质粒的复制。
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