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目的: 非编码序列研究的深入使假基因成为近年来研究热点，大量研究表明假基因的异常表达与许多恶性肿瘤发生发展密切相关。前期研究发现Cripto-1的假基因Cripto-3能够促进大肠癌细胞株增殖和侵袭，但是假基因Cripto-3在人大肠癌发生发展中的作用及机制尚不清楚。本研究系统检测大肠癌患者组织标本内Cripto-3的表达水平，并分析Cripto-3表达水平与大肠癌患者临床病理指标及预后的关系，采用裸鼠成瘤实验观察Cripto-3体内调控作用;此外，本研究还进一步借助功能分类基因芯片初步探讨Cripto-3调控大肠癌生物学行为的分子机制。 方法: 1、收集78例大肠癌组织标本，同时记录患者临床病理资料并进行随访。采用实时荧光定量PCR方法(quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)检测大肠癌患者癌组织和正常组织中Cripto-3表达水平，并分析癌组织中Cripto-3表达水平与患者临床病理资料及预后的关系。 2、复苏并培养人大肠癌SW620和HCT-116细胞株，采用脂质体转染法将siRNA-NC(negative control)和siRNA-Cripto-3转入SW620细胞株，空载质粒pCMV和pCMV-Cripto-3转入HCT-116细胞株，将这四组细胞株分别注射入裸鼠皮下，观察裸鼠一般情况及成瘤时间，每两天测量肿瘤体积大小，连续测量10次，于接种后35天处死裸鼠称瘤重，采用qRT-PCR方法检测移植瘤中Cripto-3表达水平。 3、借助功能分类基因芯片检测 SW620-siRNA-NC细胞株和SW620-siRNA-Cripto-3细胞株中大肠癌发生转移相关基因的变化，并随机挑选三个变化较明显的差异表达基因VEGFA、MMP9、E-Cadherin，采用Westernblot验证蛋白水平。 结果: 1、实时荧光定量PCR结果显示:78例大肠癌患者癌组织中Cripto-3表达水平显著高于正常组织（1.02±0.10 vs0.36±0.24，P＜0.001）;有浆膜侵袭的患者癌组织中Cripto-3表达水平高于无浆膜侵袭的患者（1.05±0.09 vs0.94±0.10)，有淋巴结转移的患者癌组织中Cripto-3表达水平高于无淋巴结转移的患者（1.07±0.10 vs0.95±0.08），DukesC、D分期的患者癌组织中Cripto-3表达水平明显高于DukesA、B分期的患者（1.06±0.10 vs0.97±0.07）(P均＜0.001)，而在不同发病部位、分化程度、性别、年龄、肿瘤大小之间无差异（P均＞0.05）。 2、分析Cripto-3表达水平与患者临床病理资料关系，结果显示:大肠癌患者癌组织中Cripto-3表达水平与患者浆膜侵袭、淋巴结转移、Dukes分期、TNM分期有关(P＜0.05)，而与患者性别、年龄、肿瘤大小、发病部位、分化程度无关(P＞0.05)。应用Kaplan-Meier分析癌组织中Cripto-3高表达与患者预后关系，结果显示:高表达Cripto-3的患者无论总生存期(overall survival，OS)（P=0.005）还是无瘤生存期(disease free survival，DFS)(P=0.010)都比低表达Cripto-3的患者要短。 3、建立大肠癌裸鼠移植瘤模型，结果显示:20只裸鼠有19只成瘤，成瘤率为95％。将siRNA-Cripto-3和siRNA-NC转入SW620细胞株，皮下注射裸鼠成瘤，结果显示:与SW620-siRNA-NC组相比，SW620-siRN A-Cripto-3组肿瘤体积减小（P＜0.05，n=10）;SW620-siRNA-Cripto-3组瘤重明显低于SW620-siRNA-NC组（0.15±0.14 vs0.44±0.21，P＜0.05）;与SW620-siRNA-NC组相比，SW620-s iRN A-Cripto-3组裸鼠移植瘤中Cripto-3表达量明显下降（0.37±0.16vs1.33±0.41，P＜0.01）。将空载质粒pCMV和pCMV-Cripto-3转入HCT-116细胞株，皮下注射裸鼠成瘤，结果显示:与HCT-116-pCMV组相比，HCT-116-pCMV-Cripto-3组肿瘤体积明显增大(P＜0.01，n=10); HCT-116-pCMV-Cripto-3组瘤重明显高于HCT-116-pCMV组（1.77±0.35 vs1.00±0.15，P＜0.01）;与HCT-116-pCMV组相比，HCT-116-pCMV-Cripto-3组裸鼠移植瘤中Cripto-3表达量明显增高(0.70±0.10 vs0.22±0.09,P＜0.001)。 4、采用功能分类基因芯片检测siRNA-Cripto-3和siRNA-NC转染的SW620细胞株，结果显示:88个肿瘤发生转移相关基因中，有55个基因表达出现明显变化，其中下调基因51个，上调基因4个，下调和上调基因中均有促进肿瘤发生转移的基因和抑制肿瘤发生转移的基因。随机挑选VEGFA、MMP9、E-Cadherin这三个较明显的差异表达基因，采用Western blot验证芯片结果，结果显示:与转染siRNA-NC组相比，转染siRNA-Cripto-3组中VEGFA和MMP9表达下调，E-Cadherin表达上调，蛋白水平变化与芯片结果一致。 结论: 1、大肠癌患者癌组织中Cripto-3表达水平显著高于正常组织，且临床表型倾向恶性的患者癌组织中Cripto-3表达水平更高;分析Cripto-3与患者临床病理指标及预后关系发现，Cripto-3高表达与患者浆膜侵袭、淋巴结转移、Dukes分期、TNM分期、总生存期及无瘤生存期密切相关;体内研究发现Cripto-3能够促进裸鼠大肠癌移植瘤发展进程，提示Cripto-3在大肠癌发生发展中发挥重要促进作用。 2、功能分类基因芯片检测及验证发现Cripto-3可以通过多基因、多通路调控大肠癌发生发展，进一步从分子水平证实了假基因Cripto-3在大肠癌中的作用，调控Cripto-3的表达可以作为大肠癌诊断和治疗潜在靶点。