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伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)是α疱疹病毒亚科的重要成员之一。伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由PRV感染引起,会导致怀孕母猪流产、呼吸和神经系统障碍以及仔猪死亡。细胞自噬是机体维持内环境稳定的一种程序性死亡,机体利用自噬抵抗外来病原微生物入侵;此外,细胞自噬一般伴随着细胞凋亡的发生,调控细胞凋亡的蛋白也可以调控细胞自噬。本研究在PRV感染PK15细胞中,利用免疫印迹(WB)方法,检测PRV感染细胞的自噬水平;利用流式细胞术和WB方法,探讨PRV感染细胞的凋亡水平;利用自噬抑制或诱导剂调控细胞自噬水平,探讨自噬对PRV增殖的影响,利用RT-q PCR和WB检测Beclin1、Bcl-2和Bcl-x L的转录和翻译水平;最后利用免疫共沉淀实验分析PRV感染PK15细胞中Beclin1与抗凋亡家族蛋白Bcl-2和Bcl-x L的结合水平。主要研究结果如下:1.PRV感染诱导细胞自噬,可能依赖于PI3K-Ⅰ/AKT信号通路PRV感染PK15细胞导致LC3-Ⅱ蛋白的表达明显增多,表明PRV感染诱导了LC3-Ⅰ蛋白脂化成LC3-Ⅱ蛋白;且P62蛋白表达量也极显著下降,进一步表明PRV感染可以诱导细胞自噬。除此之外,还检测了细胞自噬的主要信号通路PI3K-Ⅰ/AKT,结果显示AKT蛋白表达水平无明显变化,但其S473位点磷酸化水平显著减少。2.PRV感染诱导细胞凋亡,同时激活Caspase-9和Caspase-8蛋白利用流式细胞术检测了细胞凋亡,结果显示PRV感染可诱导细胞凋亡;同时,利用了WB检测PRV感染Caspase-9和Caspase-8剪切水平,结果表明Cleaved Caspase-9和Cleaved Caspase-8表达水平都显著地上调。3.细胞自噬抑制PRV增殖分别利用自噬抑制剂3-MA和自噬诱导剂Rapa干扰自噬水平,探讨其对病毒增殖的影响。研究结果表明,3-MA有效地抑制细胞自噬,PRV非结构蛋白g E和TK基因m RNA水平、病毒衣壳蛋白VP26表达水平都显著地增加;Rapa有效地诱导细胞自噬时,显著地抑制病毒衣壳蛋白VP26表达水平。4.PRV感染抑制Beclin1和Bcl-2、Bcl-x L结合进而促进细胞自噬RT-q PCR和WB技术检测结果表明,PRV感染自噬相关蛋白Beclin1的m RNA和蛋白水平显著增加;Bcl-2的m RNA水平在感染6小时前呈现显著上升、感染6小时后具有下降(12h、24h和36h)的趋势,在蛋白水平呈现极显著上升趋势;Bcl-x L在m RNA水平呈现极显著上升(6h、12h和24h)后下降(36h)的趋势,在蛋白水平呈现极显著上升趋势。本研究利用免疫共沉淀的方法检测了与Beclin1互作的猪宿主凋亡家族蛋白Bcl-2和Bcl-x L,研究结果表明PRV感染Beclin1能与Bcl-2和Bcl-x L结合,但结合的水平明显减弱。