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本研究以鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestiler,RA)七个七种不同血清型代表菌株及具有血清学交叉反应的四个菌株为材料,采用超速离心法提取外膜蛋白(OMP)进行SDS-PAGE分析,结果表明SCAU1主要OMP大小为11kDa、19kDa;SCAU2主要OMP大小为6kDa、19 kDa、58kDa;SCAU3主要OMP大小为18kDa、54kDa;SCAU5主要OMP大小为14kDa、18 kDa、22kDa;SCAU6主要OMP大小为22kDa、27 kDa、63kDa;SCAU7主要OMP大小为19 kDa、20kDa、75kDa;SCAU8主要OMP大小15kDa、19 kDa、32kDa。菌株8(SCAUl xSCAU3)与SCAU1、SCAU3相同的0MP为18kDa、71kDa大小的OMP,菌株9(SCAU2 xSCAU3)与SCAU2、SCAU3相近的OMP为56kDa、58kDa、61kDa大小的OMP,菌株10(SCAU5 x SCAU6)与SCAU5、SCAU6相同的OMP为27kDa大小的OMP;菌株11(SCAU5 x SCAU7)与SCAU5、SCAU7相同的OMP为17kDa、21kDa大小的OMP。RA不同血清型菌株主要相同或相近OMP集中在17kDa、25kDa、70kDa大小左右,提示可以这三类OMP建立RA的鉴别诊断方法,也可建立基于OMP的RA基因分型的方法。通过Western-Blot对不同血清型RA免疫原性分析表明,其主要阳性反应OMP集中在17kDa、25kDa、70kDa大小左右这三类蛋白。为下一步进行RA亚单位疫苗的研究、基于外膜蛋白的RA基因分型及RA抗体水平的监测打下基础。
自2005年至2007年从广东、福建、广西、江西、江苏等省份送检的病鸭、死鸭及鸭病料进行RA的分离鉴定,从13次临床症状疑似RA感染的病例共73份病料中,分离出疑似RA菌株128株,通过麦康凯平板接种,氧化酶、糖醇发酵等生化试验,分离鉴定出50株RA。根据美国临床和实验室标准化协会(CLSI,2006)推荐的Kirby-Bauer(K-B)琼脂法进行β-内酰胺类(青霉素G、头孢氨苄)、磺胺类(复方新诺明)、四环素类(四环素、多西环素)、氯霉素类(氯霉素、氟苯尼考)、氨基糖苷类(链霉素、庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星、壮观霉素)、利福霉素类(利福平)、氟喹诺酮类(环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星)等七类共16种抗生素进行药物敏感试验,总体情况为耐药占53.30%,中介占15.1096,敏感占31.50%,耐药情况相当严重。耐药率由高到低依次为:复方新诺明(SXT)81.40%、四环素(TE)81.40%、青霉素G(P)74.42%、诺氟沙星(NOR)69.77%、环丙沙星(CIP)65.12%、利福平(RA)62.79%、氧氟沙星(OFL)60.47%、壮观霉素(SPT)55.81%、氯霉素(C)53.49%、卡那霉素(K)53.49%、链霉素(S)41.86%、庆大霉素(GM)39.53%、头孢氨苄(CX)32.56%、多西环素(D0)32.56%、氟苯尼考27.91%、阿米卡星(AN)20.93%。RA治疗临床用药推荐为阿米卡星、氟苯尼考、庆大霉素、链霉素,敏感率依次为72.09%、58.14%、51.16%、46.51%。对氟苯尼考耐药菌株FloR,氟喹诺酮类耐药菌株的GyrA、ParC、Qnr,利福平耐药菌株的rpoB等耐药基因进行PCR扩增。12株氟苯尼考耐药RA中FloR基因阳性4株,PCR产物大小约为1200bp,与NCBI上发表的大肠杆菌、巴氏杆菌、沙门氏菌等FloR基因序列相似性为82.3%~99%。32株氟喹诺酮类抗生素耐药RA中Onr阳性1株,PCR产物大小约为300bp,与NCBI上发表的肺炎克伯氏杆菌、大肠杆菌、阴沟肠杆菌等Qnr基因的相似性为95%~98%。未能扩增GyrA、ParC基因。27株利福平耐药的RA中rpoB耐药基因阳性1株,PCR产物大小约为390bp,与NCBI上发表其他种属菌株rpoB基因相似性为78%~87%。