肉苁蓉多糖和白花蛇舌草多糖的分离纯化、结构分析和生物活性研究及多糖硫酸化方法的研究

来源 :中国科学院上海生命科学研究院上海药物研究所 中国科学院上海药物研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chinadongfang2
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肉苁蓉(Cistanche deserticola Y.C.Ma)是列当科多年生寄生草本植物,是一种名贵中药材。它具有提高机体免疫功能、抗氧化、抗衰老等多方面药理作用。肉苁蓉已知的化学成分主要有苯乙醇苷类、环烯醚萜类、糖醇、甾醇、多糖类等。国内外对肉苁蓉多糖虽有报道,但对各种组分未进行充分的纯化,因而无法全面了解肉苁蓉中多糖的类型、含量及它们与肉苁蓉药理作用的关系。本文对肉苁蓉中的多糖组分进行了深入的分离、纯化,并对获得的均一多糖进行化学结构研究和生物活性测定。肉苁蓉药材分别用冷水、沸水和1 mol/L NaOH溶液进行提取,获得三种粗多糖,然后通过DEAE-纤维素柱层析和各种凝胶过滤层析法进行分离、纯化,获得7种均一的肉苁蓉多糖。应用糖组成分析、甲基化分析、高碘酸盐氧化、乙酰解、锂降解和酶水解等化学及生化方法和1H NMR、13C NMR、2DNMR、MS、IR等光谱学方法对它们的化学结构及性质进行了研究。发现肉苁蓉中含有淀粉及非淀粉类葡聚糖、II型阿拉伯半乳聚糖取代的鼠李半乳糖醛酸聚糖(RG-I)、木葡聚糖、异木聚糖和主要含有鼠李糖、葡萄糖和半乳糖醛酸的多糖-蛋白复合物。   白花蛇舌草(Hedyotis diffiusa Willd)为茜草科植物,临床用于止血、杀菌、抗炎、抗肿瘤。已报道的白花蛇舌草化学成分主要有甾醇类、三萜类、环烯醚萜类、蒽醌类等,对白花蛇舌草多糖的研究报道很少,而且已有的报道中主要对水提取的粗多糖进行研究。为了全面了解白花蛇舌草中的多糖组分的类型和结构,我们对干燥的白花蛇舌草全草进行水提和碱提,分别获得粗多糖。经阴离子交换柱层析,凝胶过滤柱层析分离,纯化,从碱提多糖中获得一种均一的多糖组分HDB-2Bb2。用糖组成分析、甲基化分析、高碘酸盐氧化等化学方法和1H NMR、13C NMR、2D NMR、MS、IR等光谱学方法对它们的化学结构及性质进行了研究,确定它是一种4-O-Me-葡萄糖醛酸基-(1→4)-β-D-木聚糖,该类多糖为碱提多糖的主要组分。   除了对多糖化学的研究,还对所分离到的多糖组分的免疫活性进行了研究,活性测定表明,活性最强的多糖组分都具有较多的分支或在非还原末端含有糖醛酸,果胶类多糖,特别是具有复杂支链结构的RG-I型果胶是肉苁蓉和白花蛇舌草水提液中的主要免疫活性多糖,多糖组分中的蛋白质在体外试验中对免疫活性有显著的抑制作用。   本文还对三种常用的多糖硫酸化的方法进行了比较,结果表明,1)氯磺酸-吡啶法(CSP)具有较高的产率和硫酸基含量,但会导致多糖的明显降解。2)DCC法反应条件温和,时间短,其产率及硫酸化程度取决于多糖在N,N-二甲基甲酰胺中的溶解度。3)硫酸-尿素法(SDU)的产率和硫酸基取代度均低于CSP法,但明显优于DCC法,其优点在于操作简单,便于大量制备。
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