大字杜鹃核型分析及种质资源遗传多样性研究

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大字杜鹃(Rhododendron schlippenbachin Maxim.)杜鹃亚属,野生种。其植株展枝优美,花大色艳,为较好的观姿、观花植物,大字杜鹃在吉林省仅分布在珲春市境内,数量十分稀少。本研究对大字杜鹃进行了细胞学研究,为揭示其种间关系、起源和演化提供必要的资料;同时利用RAPD技术对大字杜鹃群体间和群体内进行遗传多样性的分析及亲缘关系的鉴定,旨在进一步建立大字杜鹃核心种质以及更好地利用其资源奠定基础,为我国大字杜鹃育种工作提供参考。研究结果如下:1、通过对大字杜鹃进行核型分析得到大字杜鹃体细胞染色体数2n=28,染色体基数n=14,染色体核型公式为2n=2x=28=12m+16sm,核型为2B,臂比变幅为1.08~2.59,相对长度变幅在10.44%~4.40%,着丝点指数变幅为27.84%~48.51%,平均值为38.13%,核型不对称系数为61.17%。2、以改进的CTAB法提取大字杜鹃叶片基因组DNA,分别研究了模板DNA浓度,引物浓度,dNTP浓度,Taq DNA聚合酶量及镁离子浓度等因素对大字杜鹃RAPD反应结果的影响。通过对各因子的组合比较,建立了大字杜鹃RAPD反应的优化体系,即总反应体积为25μL,其中包括10×Taq酶配套缓冲液2.5μL,模板DNA浓度为50ng/μL,引物浓度为0.5μmol/L,dNTP浓度为0.15mmol/L,Taq DNA聚合酶为1U,Mg2+浓度为2.0mmol/L,其余用重蒸馏水补足。扩增程序为94℃预变性5min,94℃变性1min,38℃退火40s,72℃延伸2min,共41个循环,72℃延伸7min。3、采用RAPD技术对大字杜鹃6个天然群体进行了遗传多样性分析,从160个随机引物中筛选出了重复性好、有丰富多态性的8个引物,共产生176条带,其中多态性带153条,占86.93%。根据RAPD二元数据结果,计算出了6个群体间的遗传距离和相似系数,并根据UPGMA法进行了聚类分析,建立了6个大字杜鹃群体间的聚类分析树状图。结果表明:6个大字杜鹃群体可以分成3类,第1类为中国延边珲春敬信北坡和敬信南坡,第2类为朝鲜琵琶岛北山、牡蛎泡和泽思岭,第3类为朝鲜琵琶岛海边,初步鉴定了大字杜鹃不同种群之间的亲缘关系。4、采用RAPD技术对延边州珲春敬信南坡大字杜鹃群体内23个个体进行了遗传多样性分析,筛选出了5个引物,共产生73条带,其中多态性带68条,占93.15%。根据RAPD二元数据结果,计算出了23个个体间的遗传距离和相似系数,根据UPGMA方法进行聚类分析,建立了同一群体内23个大字杜鹃个体间的聚类分析树状图。结果表明:23个大字杜鹃个体可以分为3类,分别为:第1类包括1、2、11、3、8、9、12、19、18、21、23、4,第2类包括10、20、13、14、15、17,第3类为5、6、7、16、22。
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