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兔出血症病毒(Rabbit Haemorrhagic Disease Virus，RHDV)是实验动物必须排除的病源微生物之一。由于至今还没有适于RHDV增殖的敏感细胞，使得RHDV的检测成为实验动物质量控制中的一个难点。 为建立兔出血症病毒(Rabbit haemorrhagic disease Virus，RHDV)抗体ELISA检测方法，我们克隆了RHDV的VP60全长基因，构建了表达质粒。对表达产物进行了纯化，将其作为抗原，在国内首次建立了用于RHDV抗体检测的RHDV-VP60-ELISA方法，并对国内7省市的338份普通级兔血清和49份SPF兔血清进行RHDV抗体检测。 根据几株已知的RHDV VP60序列设计引物，从中国农业大学动物医学院提供的发病兔肝中提取了RHDV RNA，用Oligo(dT)作为引物反转录合成cDNA，用PCR扩增出VP60基因片段。将纯化的基因产物连接到pGEM-T-easy载体，测序得到克隆基因的核苷酸序列，经BLAST程序搜索证实为RHDV VP60全长基因，将重组质粒命名为pGEM-T-VP60。同时，利用分子生物学软件DNASTAR将得到的目的基因序列同其它已知RHDV VP60序列进行比较，并进行进化树分析。 我们构建了原核表达质粒并在大肠杆菌中高效表达了包含全长VP60序列的pET-VP60重组蛋白，该重组蛋白为包涵体表达。通过亲和层析方法对该蛋白进行了纯化，得到了纯度为98％的目的蛋白。 用表达的该目的蛋白作为包被抗原，以HRP标记的山羊抗兔IgG作为二抗，按间接酶联免疫试验原理，建立了RHDV抗体的ELISA方法，在对方法的敏感性、特异性、精密性、重复性和稳定性测定、比较分析的基础上，利用ELISA方法对来自国内7省市的338只普通级兔和49只SPF兔进行RHDV抗体检测，以此对实验用兔RHDV免疫效果做出客观评价。 根据实验数据显示，实验中得到的重组蛋白具有良好的抗原性，RHDV-VP60-ELISA方法的敏感性、特异性、重复性、精密性与稳定性好。RHDV-VP60的克隆表达以及RHDV-VP60-ELISA检测方法的建立，解决了RHDV病毒制备和提纯需要一定实验条件和复杂的问题，也克服了以往实验用兔RHDV抗体检测方法敏感性不高、操作繁琐、标准化程度低并难以推广应用的实