【摘 要】
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建立稳定可靠的高频离体再生体系是利用基因工程和其他技术育种的基础。本文在建立二倍体青花菜高频离体再生体系的基础上,利用组织培养和秋水仙素相结合的方法诱导获得了其
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建立稳定可靠的高频离体再生体系是利用基因工程和其他技术育种的基础。本文在建立二倍体青花菜高频离体再生体系的基础上,利用组织培养和秋水仙素相结合的方法诱导获得了其同源四倍体材料,并研究了同源四倍体青花菜的离体再生及其倍性鉴定。1以青花菜带柄子叶为外植体,研究其高频离体再生体系。比较不同基因型、不同浓度植物生长调节剂、不同时期苗龄外植体对不定芽再生频率的影响。结果表明:‘04J-20’8d苗龄外植体不定芽的再生频率最高为100%(MS+0.1 mg·L-1 NAA+6.0mg·L-1 6-BA+0.7%Agar+3%sucrose),继代培养增殖系数达8～9(MS+0.2 mg·L-1NAA+2.0 mg·L-1 6-BA+0.7%Agar+3%Sucrose),生根培养诱导生根率100%(1/2MS+0.1 mg·L-1 NAA+0.7%Agar+3%Sucrose),驯化移栽成活率95%,获得增殖200倍的田间再生植株。以青花菜04J-19的成熟叶片作为外植体研究其在不同浓度植物生长调节剂上不定芽的再生能力。结果表明:成熟叶片为外植体时不定芽在MS+0.1mg·L-1 NAA+4.0mg·L-1 6-BA+0.8%Agar+3%Sucrose上再生频率最高,为54.2%,平均每块外植体产生2.01个不定芽。培养基中附加AgNO3对叶片不定芽的再生有一定的促进作用。继代培养增殖系数达5～6(MS+0.2 mg·L-1 NAA+2.0 mg·L-1 6-BA+0.7%Agar+3%Sucrose),生根培养诱导生根率100%(1/2Ms+0.1 mg·L-1 NAA+0.7%Agar+3%Sucrose),驯化移栽成活率93%,获得增殖的田间再生植株。2青花菜带柄子叶在MS+0.01 mg·L-1 NAA+9.0 mg·L-1 6-BA+0.7%Agar+3%Sucrose离体培养过程中发现突变植株。经过形态学、细胞学和营养品质测定,结果表明再生植株中有13株四倍体疑似株在植株形态、叶片、气孔、花粉粒、种子形状和大小方面与二倍体差异明显;其中12株花粉母细胞减数分裂中期Ⅱ的小孢子染色体数目为n=2x=18,为四倍体植株。另外,四倍体植株维生素C、可溶性糖和可溶性蛋白质含量均高于对照。3以青花菜品种‘海兹’作为材料,用不同浓度秋水仙素结合组织培养处理离体再生不定芽,根据形态学、细胞学和流式细胞仪鉴定筛选四倍体再生植株。结果表明:用含秋水仙素的液体培养基处理2 cm长的再生苗,诱导形成四倍体再生芽的方法效果较好。秋水仙素质量浓度为200 mg·L-1和48 h的组合最佳,每个外植体平均可产芽2.1个,再生植株突变率为83.33%,四倍体加倍率可达79.17%。与二倍体相比,四倍体植株叶片、气孔等均表现巨大性;用流式细胞仪进行倍性鉴定,对照DNA相对含量为200,四倍体再生植株为400,其鉴定结果与根尖染色体鉴定结果一致。表明获得的再生植株为四倍体。4以同源四倍体青花菜带柄子叶为外植体,研究其离体再生体系,结果表明:不同浓度植物生长调节剂对不定芽再生频率的影响差异显著,10 d苗龄外植体在培养基MS+0.05 mg·L-1 NAA+3.0 mg·L-1 6-BA+0.8%琼脂+3%蔗糖上不定芽的再生频率最高为63.3%;继代培养(MS+0.04 mg·L-1 NAA+4.0 mg·L-1 6-BA+0.8%琼脂+3%蔗糖)增殖系数6,生根培养(1/2MS+0.1 mg·L-1 NAA+0.7%琼脂+3%蔗糖)诱导生根率100%,移栽成活率90%。流式细胞技术分析及染色体计数鉴定结果表明,再生植株的染色体数为2n=4x=36,DNA相对含量为二倍体的二倍。
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基于不锈钢应力腐蚀的危害性,本文从应力腐蚀的概念入手,对不锈钢应力腐蚀原因及其钢结构破坏机理作详细分析,得出相关结论供同行参考。
Based on the harm of stainless st
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