【摘 要】
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该文通过制备针对LAPTM4B-35,而不针对LAPTM4B-24的抗体,检测了LAPTM4B-35在肝癌等7种癌组织的表达,并分析了其与与肝癌组织分化的相关性.同时还初步探索了LPAPTM4B启动子与
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该文通过制备针对LAPTM4B-35,而不针对LAPTM4B-24的抗体,检测了LAPTM4B-35在肝癌等7种癌组织的表达,并分析了其与与肝癌组织分化的相关性.同时还初步探索了LPAPTM4B启动子与转录因子Est-1的相互作用.该文首先以LAPTM4B全长cDNA序列为模板,通过PCR扩增得到LAPTM4B N端胞质域中99个氨基酸的编码序列,并将其克隆到表达GST融合蛋白的pGEX-KG质粒中,构建了重组质粒pGEX-KG-N<,1-99>,转化并诱导大肠杆菌JM109后获得了GST-LAPTM4B-N<,1-99>融合蛋白的表达,并通过GlutathioneSepharose4B亲和层析柱纯化了该融合蛋白,将其作为免疫原制备兔源的多克隆抗体:LAPTM4B-N<,1-99>-PAb.利用ELISA测定其滴度,Western Blot鉴定其特异性.利用所获得的LAPTM4B-N<,1-99>-pAb,分析了20例肝癌病人的肝癌组织标本,发现LAPTM4B-35的表达水平与肝癌组织的病理分级存在相关性.同时为了探索LAPTM4B-35在肝癌之外的其它癌组织的表达情况,该文通过免疫组化和多癌组织的组织芯片进行了分析.该室曾采用半定量RT-PCR法分析了14对肝癌和配对非癌肝组织、肝癌细胞系(7402、HLE、和HG16)以及其他3种细胞系(3T3、293T和黑色素瘤B16)中LAPTM4B和Ets-1基因的表达,发现Ets-1在肝癌组织表达比配对非癌肝组织高,且与LAPTM4B的表达规律较一致,即在肝癌和配对非癌肝组织LAPTM4B存在差异表达的肝癌患者中Ets-1也呈差异表达.这提示二者可能存在某种联系.为了进一步研究LAPTM4B基因在肝癌表达失控的原因及其转录调控机制,该文利用本室已成功克隆的LAPTM4B基因的启动子及转录因子Est-1进行共转染,通过测定荧光素酶活性,分析了两者之间的相互关系.该文制备了特异针对LAPTM4B-35的多克隆抗体.利用此抗体确证了LAPTM4B-35的表达水平与肝癌组织的分化程度呈负相关性,并指明其在多种来源于单层柱状上皮细胞的癌组织中表达,如肝癌、乳腺癌、胃癌、肺癌和结肠癌,而在来自复层上皮的癌组织低表达,如食管癌和直肠癌.该文为进一步研究LAPTM4B-35的功能打下了基础.同时对也初步探讨了LAPTM4B基因的启动子与转录因子Est-1之间的相互作用,为下一步研究其转录调控提供了一些线索.
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