论文部分内容阅读
目的: Pyrin是由MEFV基因编码的功能蛋白，主要表达于多形核白细胞和单核细胞，它的突变是多种炎症相关疾病的致病原因。巨噬细胞极化是巨噬细胞在不同环境下表现出的不同功能状态，Ml型巨噬细胞具有很强的促炎及抗原提呈能力。既有研究表明Pyrin在促进炎症发生发展过程中起着一定作用，巨噬细胞Ml型极化在发挥固有免疫防御功能方面也具有一定促炎能力，但Pyrin是否能通过影响巨噬细胞极化发挥免疫调节作用并不清楚。本研究拟探讨Pyrin在巨噬细胞Ml型极化中的作用，为进一步阐明相关疾病的发病机制及治疗提供理论依据。 方法: 培养THP-1单核细胞株，提取原代人外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)、小鼠骨髓来源巨嗤细胞(bone marrow-derivedmacrophage,BMDM),利用脂多糖(lipopolysaccharide，LPS,100ng/mL)复合干扰素-γ(interferon-γ, IFN-γ,20 ng/mL)干预(THP-118 h, PBMC、BMDM24h)构建巨噬细胞Ml型极化模型，qPCR、Western blot和流式细胞术检测Ml型极化相关标志物，同时检测MEFV基因和Pyrin蛋白表达水平。在THP-1细胞中利用siRNA低表达MEFV基因，进而构建巨噬细胞Ml型极化模型，qPCR检测Ml型极化相关标志物。 结果: 与对照组相比，在LPS+IFN-γ激后，THP-1细胞Ml型极化标志物：肿瘤坏死因子-α(tumornecrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)、CD80、HLA-DR, PBMC细胞Ml型极化标志物：TNF-α、IL-1β、IL-6、CD80, BMDM细胞Ml型极化标志物：TNF-α、IL-1β、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein1，MCP-1)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)、F4/80+CD11c+表达均明显增加，提示巨噬细胞Ml型极化模型构建成功;在构建成功的3种Ml型极化模型中，MEFV基因和Pyrin蛋白表达水平明显增加;在低表达MEFV的THP-1诱导巨噬细胞Ml型极化模型中检测Ml型极化标志物：IL-1β、IL-6、HLA-DR较对照组无明显变化。 结论: 巨噬细胞Ml型极化过程中伴随着Pyrin表达增加，Pyrin可能与巨噬细胞Ml型极化相关。