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马兜铃酸是马兜铃属植物的主要活性成分,含有马兜铃酸的多种中草药具有清心火、抗菌、提高细胞免疫能力等功效,多年来在临床上得到了广泛的应用。近年来的研究表明,马兜铃酸具有致突变以及致癌性等强毒副作用,长期服用含有马兜铃酸的药物会明显提高肾病和癌症的发病率。由其引起的中草药肾病,以肾小管萎缩和肾功能衰竭为主要症状,严重危害了人们的身体健康。鉴于其强毒副作用,国内外卫生组织以及相关质量控制机构陆续禁止或控制含有马兜铃酸的产品,特别是马兜铃属中草药的进口和销售,为我国中草药的长远发展带来了严重的负面影响。由此可见,开发快速、准确、有效的高灵敏度马兜铃酸检测方法具有重要的市场价值和临床意义。本文系统研究了毛细管电泳技术在马兜铃酸检测方面的应用,为相关药材的市场质量控制以及马兜铃酸的毒理学研究提供了技术支持。
论文第一章介绍了近年来毛细管电泳在仪器、理论以及前沿技术应用等方面的最新进展,并对近10年来毛细管电泳在中草药毒性成分分析中的应用进行了详细综述。另外,提出了本文的立题依据,阐述了毛细管电泳方法在马兜铃酸检测方面的优越性。
论文第二章到第四章研究了多种毛细管电泳模式,包括毛细管区带电泳、胶束电动毛细管色谱、微乳电动毛细管色谱等在马兜铃酸分离检测中的应用,并与高效液相色谱法的测定结果进行了比较。考察了不同电泳背景缓冲液组成对分离效率的影响,并对其在不同模式下的分离机制和电泳行为进行了系统研究。开发了β环糊精修饰的毛细管区带电泳法,并对马兜铃属植物样品中的马兜铃酸进行了快速检测,对种属和产地对马兜铃酸含量分布的影响进行了归纳。通过胶束电动色谱模式对马兜铃酸以及马兜铃酸内酰胺进行分离,对强疏水性化合物分离过程中有机溶剂对系统选择性的影响进行了归纳总结。在此基础上,以马兜铃酸作为典型化合物,探讨了胶束电动色谱体系中环糊精与SDS的竞争机制,阐述其分离机制的相互转变,为具有不同疏水性的化合物的分离模式,以及假固定相的选择提供了重要的参考。
第五章对胶束电动色谱体系中马兜铃酸的在线富集方法进行了系统研究。为克服毛细管电泳检测灵敏度低的不足,进一步降低方法检测限,使其满足痕量检测的要求,首次将在线堆积法,包括反电极堆积以及场放大进样模式应用于马兜铃酸的检测。通过对不同富集模式的比较以及对进样时间,水柱长度等参数的系统优化,建立了快速而有效的马兜铃酸高灵敏度检测方法。运用所建立的场放大进样一胶束电动色谱方法,对中成药中的马兜铃酸进行检测,方法灵敏度可提高100倍。