脐血单个核细胞分化为树突状细胞的研究

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目的通过两步法分别研究两种不同细胞因子组合FST组(FL+SCF+TPO)、FST6组(FL+SCF+TPO+IL-6)诱导脐血单个核细胞(CB-MNC)分化为树突状细胞(DC)的可行性及比较两者诱导扩增的效率,试图建立DC高效扩增体系。方法以健康孕妇的脐血为DC来源,采用两种不同细胞因子组合FST组(FL+SCF+TPO)、FST6组(FL+SCF+TPO+IL-6)诱导扩增DC。采用倒置显微镜对细胞进行形态学观察、流式细胞仪检测其诱导扩增的DC表面分子表达、混合淋巴细胞反应(MLR)及ELISA法检测诱导扩增后获取的DC培养液上清中分泌IL-12、IL-10的浓度研究扩增后的DC细胞功能,比较同等条件下两组间诱导产生DC的效率。结果:1.上述两组不同细胞因子组合均能成功诱导出DC:FST组培养的DC表面分子表达分别为CD1a(11.83±3.45)%、CD83(31.15±8.35)%、CD11c(95.18±2.92)%、CD40(93.10±5.26)%、CD86(86.24±7.17)%;FST6组培养的DC表面分子表达分别为CD1a(13.62±4.05)%、CD83(27.82±8.81)%、CD11c(83.29±5.31)%、CD40(85.30±6.85)%、CD86(78.86±2.23)%。2. FST组经上述条件培养所收获上述表型的细胞(2.03±0.13)×106个,FST6组收获上述表型的细胞(2.58±0.11)×106个细胞,两组间所收获的DC数量比较,FST6组诱导DC的效率较FST组高(P<0.05)。3.上述两组扩增体系所诱导的DC具有典型的树突样突起,形态上相似。FST组诱导获得的DC与外周血非贴壁细胞在1:80、1:40、1:20、1:10的比列混合培养情况下放射性核素值(CPM值)分别为1660±24、8380±56、12024±32、8250±13,FST6组诱导获得的DC与外周血非贴壁细胞在1:80、1:40、1:20、1:10的比列混合培养情况下CPM值分别为1730±16、8053±46、11920±27、8440±31,两组对淋巴细胞均具有激发和促增殖作用,且在1:20时刺激效应最大。FST组分泌的IL-12、IL-10分别为354.23±11.33pg/ml、32.37±7.74pg/ml,FST6组分泌的IL-12、IL-10分别为361.77±9.31pg/ml、30.50±5.50pg/ml,FST组和FST6组两组培养的DC均能够分泌IL-12、IL-10,分泌IL-12、IL-10的功能没有统计学意义差异(P>0.05)。结论FST组(FL+SCF+TPO)及FST6组(FL+SCF+TPO+IL-6)两种扩增体系均能诱导CB-MNC分化成为功能性成熟的DC;其中FST6组(FL+SCF+TPO+IL-6)扩展体系较FST组(FL+SCF+TPO)扩增效率为高;两组所诱导产生的DC活性和功能无明显差异。
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