【摘 要】
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Oneonase(ONC)是一种在两栖类蛙(Rana Pipiens)卵细胞内存在的核糖核酸酶,RNaseA超家族中的一员,研究证实其具有很好的抗肿瘤效果。本文通过基因工程的法,利用pET22b(+)表达
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Oneonase(ONC)是一种在两栖类蛙(Rana Pipiens)卵细胞内存在的核糖核酸酶,RNaseA超家族中的一员,研究证实其具有很好的抗肿瘤效果。本文通过基因工程的法,利用pET22b(+)表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中表达Onconase并通过包涵体复性、蛋白纯化等程序最终获得与天然蛋白活性相似的重组蛋白。体外检测,ONC对小鼠色素瘤细胞(B16)和人慢性骨髓白血病细胞(K562)有显著毒性,并在裸鼠体内建人恶性间皮瘤细胞(Mesothelioma)肿瘤模型,尾静脉多次小剂量注射ONC,疗效显著。
同时,在此基础上构建核糖核酸酶与白喉毒素跨膜结构域的融合蛋白(Onc-DT203-390融合蛋白),利用表达质粒pET22b-ONC-DT203—390,同样用基因工程制备该融合蛋白。体外多种肿瘤细胞毒性实验证实,其既保有原来的Onc的活性,又具有更强的杀死肿细胞的能力,可以更广谱地用于抗肿瘤的治疗。
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技术模式：半冬性或冬性品种+秸秆还田+立体匀播+重施拔节肥水+统防统治+机械收获。关键技术：一是品种选择。选用有高产潜力、分蘖成穗率高，多穗型或中穗型的品种，其中北部冬
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