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小鼠附植前胚胎发育过程中，DNA甲基化一直处于动态变化中。受精后首先雄原核在DNA复制前发生快速的主动去甲基化，第一次卵裂后，由于缺少维持DNA甲基化的酶-Dnmtl，合子基因组发生被动去甲基化直到桑椹胚，囊胚时内细胞团重新建立甲基化，而滋养层细胞仍然维持低甲基化状态.5-脱氧杂氮胞苷(5-AZA-CdR)是常用的去甲基化试剂，在研究胚胎发育、细胞分化、肿瘤治疗等方面有重要作用.本试验即利用5-AZA-CdR去甲基化的性能研究DNA甲基化与小鼠附植前胚胎发育的关系.通过本试验的研究不仅可以深入理解小鼠胚胎发育与DNA甲基化的关系，而且对于探讨5-AZA-CdR的作用机理、为其更好的应用于肿瘤治疗也有所帮助。
1. 5-AZA-CdR与小鼠附植前胚胎发育
将不同浓度的5-AZA-CdR(0.2，1.0和5.0 μM)分别从原核期胚胎、2-细胞期胚胎和4-细胞期胚胎加入，持续作用直至体外发育完毕，结果表明，从原核期加入时，0.2和1.0μM能支持胚胎发育到4-细胞，5.0 μM只能支持胚胎发育到2-细胞：从2-细胞期加入时，0.2和1.0 μM能支持部分胚胎发育到8-细胞，但8-细胞不能致密化，5.0μM只能支持胚胎发育到4-细胞；从4-细胞期加入时，0.2和1.0 μM虽然能支持胚胎发育到早期桑椹胚，但却没有一个能够继续发育到囊胚，而5.0 μM处理中，也有部分发育到桑椹胚，但比例显著低于对照组(p<0.05).综合以上结果，表明5-AZA-CdR降低了小鼠附植前胚胎的发育能力，尤其对8-细胞期以后的影响更大，并且这种影响是浓度依赖性的。
从TUNEL和Annexin-V的检测结果看，5.0 μM 5-AZA-CdR处理得到的8-细胞和桑椹胚发生凋亡，而低浓度的5-AZA-CdR则没有引起胚胎的凋亡，说明5-AZA-CdR引起的小鼠早期胚胎发育阻滞一定程度上与它引起的细胞凋亡有关。
2. 5-AZA-CdR与小鼠附植前胚胎的DNA甲基化
采用免疫荧光的方法检测基因组DNA甲基化水平，并用Image软件进行荧光强度的相对定量。从5-MeC免疫荧光的结果来看，5-AZA-CdR处理后，8-细胞和早期桑椹胚(致密化8-细胞)的DNA甲基化水平显著降低(p<0.05)；但2-细胞和4-细胞胚胎中DNA甲基化水平同对照组相比并没有明显改变(p>0.05)。
因为5-AZA-CdR引起的DNA甲基化变化是通过Dnmtl诱导的，所以对各时期胚胎中Dnmtlo的表达情况进行检测。发现，5-AZA-CdR处理前后Dnmtlo在2-细胞和4-细胞胚胎中都只在细胞质表达；而在8-细胞和早期桑椹胚时，5-AZA-CdR处理后，Dnmtlo从细胞核中消失.说明8-细胞和早期桑椹胚DNA甲基化的降低与Dnmtlo由细胞核中消失有一定的关系.维持DNA正常甲基化对于小鼠附植前胚胎后期(8-细胞、桑椹胚和囊胚)的发育非常重要，而且正常DNA甲基化的维持必须有Dnmtlo的参与。
3. 5-AZA-CdR与发育相关基因的表达
本试验从分子水平上探讨DNA甲基化与小鼠附植前胚胎发育的关系.首先采用BrUTP免疫荧光的方法从基因组整体水平上检测转录活性，发现2-细胞和4-细胞胚胎的转录活性同对照相比没有显著差异(p>0.05)，而8-细胞和早期桑椹胚的转录活性显著低于对照组(p<0.05)。
进一步选取与胚胎致密化和气穴化关系密切的基因Cx31、Cx43、Cx45、Cdh1和Ctnnbl，进行实时荧光定量PCR确定它们的mRNA表达量的变化.结果表明，5-AZA-CdR处理前后，2-细胞和4-细胞胚的表达量在5个基因都没有变化；从原核期加入5-AZA-CdR得到的5-7细胞的5个基因表达量几乎降到零；从2-细胞期加入5-AZA-CdR得到的非致密化8-细胞胚的5个基因的表达量大幅降低；从4-细胞期加入5-AZA-CdR得到的8-细胞胚的5个基因的表达量有不同程度的降低，当发育到早期桑椹胚时表达量继续降低.说明DNA甲基化不足引起的小鼠胚胎发育阻滞与这5个基因的异常表达有密切关系。