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近年来水杨酸(salicylic acid,SA)功能的研究已经成为生物学最重要、发展最迅速的研究领域之一,研究热点集中于其抗病性和信号转导方面。SA在抗环境胁迫方面具有正负效应,且这种正负效应可能与其诱导的活性氧水平有关。植物中的活性氧作为信号分子参与叶绿体光合电子传递及细胞死亡。
本论文以野生型拟南芥,转nahG基因的SA合成缺失拟南芥突变体和高效积累SA的cpr5拟南芥突变体为材料,采用延迟荧一光检测,叶绿素荧光成像分析等方法检测了外源水杨酸处理对拟南芥光合作用的影响;采用荧光发射光谱检测光谱分析及激光共聚焦观测分析,二氨基联苯胺(diaminobenzidine,DAB)染色观测分析等方法检测了外源水杨酸处理引起的拟南芥叶片及原生质体活性氧的积累迸发状况;采用透射电子显微镜检测,激光共聚焦观测分析和流式细胞术检测分析等研究了外源水杨酸对拟南芥叶片显微结构的破坏及对细胞死亡的影响。研究结果如下:
1.200 μmol/L外源水杨酸处理可诱导拟南芥叶片产生活性氧积累和迸发并会引起拟南芥叶片光合作用效率下降。长时间喷施处理会使拟南芥叶片受胁迫而出现坏斑和死亡。30μmol/L外源水杨酸处理3 h内可诱导拟南芥原生质体出现活性氧迸发并进一步诱导细胞出现不同程度的死亡;外源水杨酸诱导的原生质体死亡具有浓度依赖性和时间依赖性。
2.高浓度的SA可诱导细胞内高水平的活性氧积累,产生重度氧化胁迫,对拟南芥叶片和原生质体均产生了胁迫伤害。
3.与野生型拟南芥植株相比,水杨酸缺失型突变体NahG更对于外源水杨酸处理显示出微弱应答,其体内活性氧积累较为滞后且积累量较少,而高效积累SA的cpr5拟南芥突变体经外源SA处理后体内活性氧短时间内出现迸发,显示出其更易受到高浓度外源水杨酸的胁迫伤害。