冰凌花转录因子AaDREB1基因的表达分析及功能鉴定

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低温、干旱和高盐等不利环境条件严重制约着植物的生长和产量。DREB(dehydration responsive element binding,干旱应答元件结合蛋白质)能特异结合启动子中含有DRE/CRT (dehydration-responsive element/C-repeat element)顺式元件(G/ACCGAC),激活许多逆境诱导基因的表达,增强植物对逆境的耐受力。对调控逆境诱导基因的表达具有非常重要的作用,在提高植物综合抗逆性方面将有巨大的应用前景。本研究在获得具有自主知识产权的AαDREB1基因基础上(基因银行注册号码为HQ889135),进一步利用半定量RT-PCR的方法分析该基因的组织特异性表达模式及在不同逆境胁迫下的表达模式;应用酵母单杂交的方法研究了该基因的转录激活分析;将已构建好的AαDREB1基因植物表达载体通过农杆菌介导的转化方法分别转化拟南芥和水稻,并对不同胁迫处理下的转基因拟南芥和水稻进行了表型分析。主要研究结果如下:(1)半定量RT-PCR结果表明:在非胁迫情况下,该基因在根、茎、叶和花中有表达,而在低温,干旱,高盐,和ABA诱导下该基因的表达量有所提高,说明了AαDREB1:基因是组成型表达的,并且低温、干旱和高盐胁迫能够诱导AαDREB1基因的表达。(2)酵母单杂交结果显示:AαDREB1基因编码的一个转录激活子能够与DRE/CRT元件特异性结合,从而激活下游报告基因的表达。(3)转基因拟南芥表型分析结果表明:AαDREB1(?)基因在拟南芥中的超表达能够增强转基因拟南芥对高盐、干旱和低温胁迫的耐受性。(4)高盐胁迫处理后,分别对转基因和野生型水稻进行了存活率和叶绿素含量的分析。结果表明:AαDREB1基因在水稻中的超表达,提高了转基因水稻的存活率,降低了转基因水稻中叶绿素的分解,从而提高了其对高盐胁迫的耐受性。(5)与野生型水稻相比,干旱胁迫处理后,AαDREBl基因在水稻中的超表达,提高了转基因水稻的存活率和可溶性糖的含量,从而提高了其对干旱胁迫的耐受性。(6)低温胁迫处理后,与野生型水稻相比,AαDREB1基因在水稻中的超表达,提高了转基因水稻的存活率和脯氨酸的含量,从而提高了其对低温胁迫的耐受性。
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