VEGF及其DNA甲基化在低氧预适应小鼠神经保护作用的研究

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目的:  通过建立小鼠低氧预适应模型,观察小鼠海马中VEGF的表达,从而了解VEGF和它的DNA甲基化是否参与低氧预适应小鼠的神经保护作用。  方法:  1侧脑室注射.选择6—8周龄,体重18—22g KM雄性小鼠随机分为DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-cdR处理组和对照组;2复制动物模型:每组又分为非低氧暴露(H0)、1次低氧暴露(H1)和重复低氧4次暴露(H4)三个处理组,每组8只,于低氧暴露后0,1,2,3和4d进行实验;3低氧实验:将小鼠置于含有新鲜空气、标定为125ml广口瓶内,用橡皮塞密闭,开始记时。当小鼠出现喘式呼吸,立即取出放入到另一广口瓶内,密闭,记时,以此类推4次。各组小鼠低氧完成后随即断头,取出海马并置于-80℃低温冰箱中保存;4 Real-timePCR法检测各组海马VEGF的mRNA水平的表达;5 Western blot分析法检测各组海马VEGF蛋白水平的表达;6 luciferase实验:克隆 VEGF promoter区并亚克隆入 pGL3-basic,检测其转录活性结果Real-time PCR和Western blot结果以β-actin为内参得到各组相对值,经实验组和对照组比较得出:(1)与未予低氧的对照组H0-0组相比,低氧零天一次H0-1组中VEGFmRNA表达明显增加,低氧零天四次H0-4组VEGFmRNA与H0组相近,没有统计学意义,P>0.05,H0-0组与H0-1组差异显著(P<0.05);(2)5-Aza-cdR处理H0-1组和 H0-4组 VEGFmRNA表达比 H0-0组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);(3) Western blot结果,Control组和实验组,随着低氧后时间的增加, VEGF蛋白的表达呈现先增加后降低,再增加后又降低的趋势,但无显著统计差异。  结论:  低氧和低氧预适应在小鼠大脑海马组织中VEGF mRNA表达有明显变化;VEGF mRNA在低氧后表达明显增加,而低氧预适应后无明显变化,表明低氧预适应可影响小鼠海马区VEGF表达;DNA低甲基化在低氧和低氧预适应中VEGF mRNA表达明显下降,蛋白表达量在低甲基化也发生明显变化,表明DNA甲基化可能参与低氧预适应小鼠的神经保护作用。
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