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真菌毒素毒性强,是农产品中常见的污染物,对人类健康具有极大的危害。目前真菌毒素的检测方法有很多种,但存在成本高,灵敏度低,检测时间长,操作复杂,试剂用量大,样品前处理繁琐等缺点。因此,开发一种简单快速、低成本、高灵敏度,集富集、净化与检测一体的技术尤为重要。本文建立了一套基于三维大孔径反蛋白石结构光子晶体免疫磁珠富集、净化与高效液相色谱荧光检测(HPLC-FLD)真菌毒素的方法。通过实验室搭建的微流控平台,采用自组装法及胶体晶体化液滴模板高温锻烧法最终制备得出三维大孔径的磁性二氧化硅反蛋白石结构光子晶体微球(MSIPCMs)。对制备微球的实验条件进行了初步的探索,实验得出:磁性颗粒采用10-50 nm 2.5%Fe304分散液;Si02纳米粒子选择5 nm的超细Si02颗粒;优化确定了 PS浓度为10%,Si02浓度为 18%,Si02:PS(v/v)=1:5,Fe3O4:Si02(v/v)=1:4,经过金相显微镜、扫描电子显微镜观察表征,发现此条件下制备的微球效果最好。最终采用不同反射峰位置的聚苯乙烯(PS)纳米颗粒,制备得到不同孔径的磁性二氧化硅反蛋白石结构光子晶体微球。从表征结果得出:微球磁性良好,色泽鲜明,大小均一,边缘光滑,内部无较大缺陷,排列整齐,结构完整,并具有大范围有序的孔道结构。建立了基于三维大孔径反蛋白石结构光子晶体免疫磁珠富集、净化与高效液相色谱荧光检测(HPLC-FLD)赭曲霉毒素A的方法。将制备得到的微球进行表面化学修饰连接功能性基团并偶联抗体,利用抗原抗体特异性反应富集、净化毒素,洗脱后采用HPLC-FLD检测。对几个关键条件进行优化,实验得出:最佳功能化基团为醛基;毒素与抗体结合时间仅需20min;洗脱剂为混合洗脱液(甲醇:乙腈(v/v)=1:1);采用OTA-Ab浓度为60μg/mL,毒素的最大富集量为200ng/mL,回收率均可达到80%以上,效果较好。三种谷物加标回收率的试验,结果分别为:大米76.75%±3.53%～79.16%±1.30%,小麦 70.01%±5.05%～72.31%±3.39%,玉米 74.64%±3.97%～82.14%±3.53%。采用已建立的方法将其应用于AFB,、ZEN毒素富集、净化检测中,进一步优化了洗脱时间,结果显示:每次洗脱时间仅需20min,洗脱3次,共需60min。经优化得出:洗脱AFB1、ZEN均采用混合洗脱液(甲醇:乙腈(v/v)=1:1)效果最好。其中,AFB1抗体浓度确定为60μg/mL,毒素的最大富集量为200ng/mL;ZEN抗体浓度确定为12μg/mL,毒素的最大富集量为400ng/mL。在三种谷物中AFB1的加标回收率结果分别为:大米76.12%± 1.67%～82.04%±4.46%,小麦70.23%±1.78%～73.76%±1.45%,玉米 70.37%±5.58%～74.17%± 2.23%。在三种谷物中 ZEN 的加标回收率结果分别为:大米 72.57%±4.24～76.02%±5.37%,小麦 80.60± 1.32%～83.14%±7.09%,玉米 82.89%±1.79%～100.12%±5.58%。经验证此方法快速简便高效,准确度高,精密度好,稳定可行,适用于不同种类的真菌毒素的富集净化检测。