【摘 要】
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仔猪水肿病是由产Vero细胞毒素大肠杆菌（VTEC）引起的急性致死性传染病,该病发病急、死亡快,往往来不及治疗,死亡率很高。能引起断奶仔猪四肢麻痹、步态蹒跚、痉挛和昏迷等神经
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仔猪水肿病是由产Vero细胞毒素大肠杆菌（VTEC）引起的急性致死性传染病,该病发病急、死亡快,往往来不及治疗,死亡率很高。能引起断奶仔猪四肢麻痹、步态蹒跚、痉挛和昏迷等神经症状。剖检可见胃壁和肠系膜水肿,因此称之为“水肿病”。研究证明,该病的发生与产Vero细胞毒素大肠杆菌的两个致病因子——F18ab（F107）菌毛与志贺样毒素Ⅱ型变异体（Shiga-like ToxinⅡvariant,SLT-Ⅱe）密切相关,其中SLT-Ⅱe起主要的毒力作用。本研究应用PCR技术扩增了SLT-Ⅱe B基因,经序列测定,结果与参考序列的同源性达100%。将PCR产物克隆到原核表达载体pET-30a中,转化入大肠杆菌BL21（DE3）并用IPTG诱导表达。通过Ni离子亲和层析纯化融合表达的SLT-Ⅱe B蛋白,以此作为免疫原免疫BALB/c小鼠。利用细胞融合技术将小鼠脾细胞和SP2/0细胞融合,经间接ELISA检测和四次亚克隆,获得6株阳性杂交瘤细胞,分别命名为2B10、3A8、3C11、3D7、3G7和4F3。经单克隆抗体亚类试剂盒鉴定,6株单克隆抗体的亚类包括IgG2a、IgG2b、IgA和IgM,且均为κ轻链。经杂交瘤细胞染色体数目分析,6株杂交瘤细胞的平均染色体数是90～115,明显多于SP2/0骨髓瘤细胞数（55～65）。ELISA检测结果显示,6株杂交瘤细胞培养上清液的效价分别为1:128～1:512。以两株分泌IgG类单克隆抗体的杂交瘤细胞（3G7、4F3）制备的腹水,效价均为1:105。阻断ELISA结果显示,6株单克隆抗体均与天然毒素（SLT-Ⅱe）有良好的反应性,且不与天然毒素LT、ST反应。通过相加ELISA测定可知,3G7和4F3两株单克隆抗体是针对不同抗原表位的单抗。
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