论文部分内容阅读
随着生命科学研究的不断发展和最新科学研究手段的应用,新的基因不断被发现,其功能和潜在应用也不断被挖掘,从而不断完善了我们对生命运行机制了解,促进了生物医学的发展。KIAA1429广泛存在于各种动物体内,近年来随着RNA甲基化的研究显示,其参与了mRNA的6-甲基腺嘌呤的甲基化修饰,但是作用机理不明朗。在本文中我们选取小鼠作为模式动物展开对该基因的研究,使用了包括CRISPR/CAS9基因编辑技术、分子克隆、显微操作、胚胎移植、细胞转染和流式分选等多种生物实验技术,探索基因经过基因编辑后对于小鼠早期胚胎发育和细胞的影响。 具体研究分为以下两个部分: 研究一:KIAA1429敲除对胚胎干细胞影响的研究。研究结果显示:1.CRISPR载体转染胚胎细胞,经过流式分选转染成功的后携带GFP的mES细胞。2.而后分选的细胞分为群体培养和单克隆细胞培养,而后基因组测序检测KIAA1429突变情况,结果显示在群体培养细胞的第一代可以检测到KIAA1429突变,但是传三代之后KIAA1429突变细胞小室;而在单克隆培养细胞中,可以检测到碱基缺失,但是基因序列均没有发生移码突变。上述结果可能显示,KIAA1429对维持小鼠干细胞活力具有重要作用,发生携带移码突变KIAA1429的细胞不能生长增殖。 研究二:KIAA1429的敲除对胚胎发育影响的研究。研究结果如下:1.使用生物信息学分析KIAA1429,构建CRISPR/Cas9质粒敲除胚胎KIAA1429基因,胚胎移植后发现该基因突变对胚胎具有致死作用,不能获得存活小鼠。2.而后我们对体外胚胎的检测KIAA149敲除情况,发现无论是发育阻滞胚胎还是囊胚,均存在KIAA149突变说明KIAA149敲除后不影响胚胎发育至囊胚期。3.最后,我们在胚胎移植之后观察不同时期的孕鼠胚胎,发现在胚胎是在移植6天之后才开始发生阻滞和死亡。上述结果表明,KIAA1429是一个与胚胎发育有关的重要基因,它的缺失会导致胚胎无法正常发育。