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目的： 1.构建FOXC1短发夹RNA干扰质粒，探讨FOXC1对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响，为胃癌发病机制的研究和基因治疗提供新的靶点。 2.检测FOXC1蛋白在胃腺癌组织中的表达，探讨FOXC1与胃腺癌临床生物学行为之间的关系。 方法： 1.设计针对人FOXC1基因的短发夹RNA序列，通过退火及酶切等连接至pGensil-1质粒上，转化感受态大肠杆菌菌株DH5α，挑选单克隆菌落提取重组质粒pshRNA-FOXC1a、pshRNA-FOXC1b及pshRNA-FOXC1c，酶切及测序鉴定重组质粒是否构建成功，并以脂质体2000为介导将质粒转染至SGC-7901细胞中，荧光显微镜下观察转染情况。 2.RT-PCR及Western blot检测胃癌细胞SGC-7901和胃粘膜上皮细胞GES-1中FOXC1mRNA及蛋白质的表达。 3.实验分组：pshRNA-FOXC1a组、pshRNA-FOXC1b组、pshRNA-FOXC1c组、pGenesil-1组及SGC-7901组，RT-PCR和Western blot检测重组质粒对SGC-7901细胞中FOXC1 mRNA及蛋白的沉默效应，MTT及流式细胞术检测其对细胞增殖及周期的影响。 4.免疫组织化学法检测胃腺癌组织中FOXC1蛋白的表达，分析该蛋白与胃腺癌临床生物学行为之间的关系。 结果： 1.测序结果显示，重组质粒pshRNA-FOXC1a、pshRNA-FOXC1b及pshRNA-FOXC1c插入序列正确，无突变，与设计一致，重组质粒构建成功。将重组质粒转染SGC-7901细胞后在荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达。 2.FOXC1在SGC-7901和GES-1细胞中均有表达，RT-PCR结果示：FOXC1mRNA在SGC-7901细胞(1.37±0.16)中的表达显著高于GES-1细胞(0.70±0.06)(P<0.05)；Western blot结果示：FOXC1蛋白在SGC-7901细胞(0.70±0.03)中的表达显著高于GES-1细胞(0.15±0.03)(P<0.01)。 3.细胞转染48小时后，FOXC1 mRNA在pshRNA-FOXC1a组(62.38±5.61)、pshRNA-FOXC1b组(64.07±4.01)、pshRNA-FOXC1c组(62.14±7.07)中的表达显著低于pGenesil-1组(84.36±6.99)及SGC-7901组(84.61±7.18)(P<0.05)；Western blot显示：FOXC1蛋白在pshRNA-FOXC1a组(38.44±1.90)、pshRNA-FOXC1b组(39.20±0.27)、pshRNA-FOXC1c组(38.25±2.03)中的表达显著低于pGenesil-1组(63.82±3.08)及SGC-7901组(65.03±2.52)(P<0.01)。 4.细胞转染48小时后，MTT结果显示：pshRNA-FOXC1a组、pshRNA-FOXC1b组、pshRNA-FOXC1c组在24h、48h及72h的细胞增殖抑制率与对应时间点pGensil-1组的细胞增殖抑制率相比，细胞增殖能力受到明显抑制(P<0.05)；流式细胞仪结果显示：pshRNA-FOXC1a组、pshRNA-FOXC1b组、pshRNA-FOXC1c组处于G1、G2期细胞的百分率较SGC-7901组显著增加(P<0.05)，处于S期细胞的百分率较SGC-7901组显著减少(P<0.05)，而pGensil-1组与SGC7901组相比较，各细胞周期差异无统计学意义(P<0.05)。 5.25例胃腺癌组织中FOXC1的表达率为62.5％，该蛋白定位于细胞核与细胞浆。FOXC1在淋巴结转移组的表达率为75％，明显高于无淋巴结转移组33.3％(P<0.05)，差异有统计学意义。 结论： FOXC1在胃癌细胞SGC-7901中呈高表达，抑制FOXC1后细胞周期被阻滞在G1、G2期，细胞增殖受到抑制；FOXC1可能在胃腺癌的淋巴结转移中起着重要作用。