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目的：在建立小鼠神经元表达蛋白质组分析方法的基础上，通过复方中药制剂四君子汤对小鼠大脑神经元的作用，并与单药制剂党参、西药胰岛素和无药作用相比较，进行神经元表达蛋白质组的差异性分析，以探讨中药及其复方制剂对细胞的药理作用，了解药物对细胞、组织器官或生物体的综合作用，为全面准确地评价由复杂生物活性物质组成的中药及其复方制剂的作用机制和药效提供实验依据。
方法：培养出生1～3天的小鼠大脑神经元，随机分为复方组(四君子汤)、单药组(党参)、西药组(胰岛素)和对照组。复方组加入四君子汤(由党参、白术、茯苓、灸甘草四味中药组成)，其中党参生药浓度为500mg/ml；单药组加入党参，其生药浓度为500mg/ml；西药组加入胰岛素100mmol/L；对照组加入等量的培养基。37℃孵育20分钟，-70℃终止反应后，裂解细胞，提取全细胞蛋白。Bradford法测定蛋白质含量，双向电泳分离。一向采用pH4-7的固相pH梯度等电聚焦(isoelectric focusing gel eleclrophoresis，IEF)，二向采用浓度10％的十二烷基磺酸钠．聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecyl sulphate-polyacrylamide gel eleetrophoresis，SDS-PAGE)，银染法染色，PDQuest 2D软件对双向电泳图谱进行差异分析。从凝胶中切取差异蛋白质斑点，运用基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization-time of flight-mass spectrometry，MALDI-TOF-MS)鉴定蛋白质。
结果：复方中药制剂作用于小鼠神经元与其他对照组的表达蛋白质组双向电泳图谱比较存在着明显的差异，表现为图谱中蛋白质斑点数目及灰度值的改变。利用PDQuest 2D软件对双向电泳图谱进行差异分析，初步筛选出10个蛋白质点。采用MALDI-TOF-MS检测得到这10个蛋白质斑点的肽指纹图谱，再结合其实验分子量、等电点等信息，以Aldente程序检索Swiss-Prot蛋白质数据库，对各蛋白质点进行匹配鉴定。确定了与四君子汤作用相关的蛋白质包括：
①磷蛋白：锌指蛋白148、蛋白激酶Chk2、UPF0415蛋白C7orf25同源物、神经丝M蛋白、TRAF家族成员相关的NF-κ-B激动剂；
②信号转导相关蛋白：Ras相关蛋白Rab-14、Ras相关蛋白Rab-3D；
③翻译相关因子：真核翻译起始因子3亚基5；
④膜蛋白：肌浆网/肌内质网钙ATP酶2、跨膜肽酶A亚基α等。
结论：
①复方中药四君子汤作用于小鼠神经元的表达蛋白质组与其他对照组比较存在明显的差异。
②经质谱鉴定和生物信息学分析，确定了真核翻译起始因子3亚基5、跨膜肽酶A亚基α、锌指蛋白148、蛋白激酶Chk2、Ras相关蛋白Rab-14、UPF0415蛋白C7or125同源物、神经丝M蛋白、TRAF家族成员相关的NF-κ-B激动剂、Ras相关蛋白Rab-3D、肌浆网/肌内质网钙ATP酶2等表达蛋白与四君子汤的作用相关。
③四君子汤的作用引起小鼠神经元多种磷蛋白修饰状态的改变，因此其药理作用极有可能是通过相应的细胞信号转导网络系统来实现的。