【摘 要】
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该研究在以往工作基础上,通过电印迹转移、干胶等手段,使得用同步辐射X-荧光(SRXRF)原位分析生物样品电泳分离后蛋白条带内微量元素含量时,基底物质的本底信号降低了约10倍.
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该研究在以往工作基础上,通过电印迹转移、干胶等手段,使得用同步辐射X-荧光(SRXRF)原位分析生物样品电泳分离后蛋白条带内微量元素含量时,基底物质的本底信号降低了约10倍.进而使SRXRF与电泳技术相结合,成为一种灵敏、实用的生物样品内微量元素Cu,Fe,Zn等种态分布的研究技术.考虑到在SDS-凝胶电泳(SDS-PAGE)分离人肝细胞胞质溶胶的样品制备过程中要对蛋白质进行变性处理,一些依靠蛋白质高级结构与其结合的金属离子会在样品处理和随后的样品分离过程中部分丢失,这样得到的金属蛋白分布信息不能真实反映样品内金属的实际存在状况.该研究将非变性的等电聚焦(IEF)技术用于蛋白质分离.针对后续的SRXRF分析要求,对IEF分离操作条件进行了初步优化.用于人肝细胞胞质溶胶内金属蛋白的分布研究,发现在10~25kDa分子量范围内,人肝细胞胞溶胶中有等电点(pI)为5.0~6.0和6.2~7.0的两个含锌条带.其中5.0~6.0条带是主要的含锌条带.另在样品的同一分子理范围内有11个pI分别为4.4、4.6、4.8、5.0、5.2、5.3、5.5、5.6、6.6、6.8和7.2的含铁条带以及pI为5.0和小于4.8的含铜条带.研究表明:IEF/SRXRF用于金属蛋白分布研究可以得到比SDS-PAGE/SRXRF更丰富的蛋白质金属结合信息.
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