拟南芥叶片愈伤组织诱导过程中细胞程序性死亡分子基础研究

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细胞程序性死亡(PCD)是高等植物发育过程中不可缺少的重要过程,对于深入地揭示植物的发育、抗逆和抗病机理,具有重要的理论意义。本研究以拟南芥叶片在MS培养基上诱导愈伤组织过程中七个不同时期(诱导的第1(对照)、3、5、7、9、11、13天)的拟南芥叶片愈伤组织为材料,从基因水平和激素水平深入研究了拟南芥叶片愈伤组织形成过程中PCD相关事件,结果如下:  1.CTAB法提取总DNA进行DNA ladder实验,其结果显示,在拟南芥叶片愈伤组织形成诱导的第7天开始出现了标志着PCD发生的DNA片段化的梯状图谱,即140-180bp倍数的DNA ladder片断。  2.TRIZOL法提取不同时期的愈伤组织的总RNA,用RT-PCR法在诱导的七个时期,即诱导的第1(对照)、3、5、7、9、11、13天的拟南芥叶片的愈伤组织中均扩增出了细胞程序性死亡相关基因类Beclin1的cDNA片段(678bp),经过克隆测序表明,与烟草叶片中Beclin1基因的同源性为95%,以RNA为探针,Northen杂交结果显示,在诱导的第5时期,即诱导的第9天,杂交信号最为强烈,即类Beclin1基因表达最为强烈。在诱导拟南芥叶片形成愈伤组织的过程中扩增到Caspase基因片断(971bp),经测序与拟南芥叶片的Caspase基因同源性为99%。  3.在诱导拟南芥叶片愈伤组织形成过程中,测定其内源激素ABA,IAA,ZRs和GA3的含量,ABA和ZRs的含量随着诱导时间逐渐升高在诱导的第七天均达到峰值随后逐渐下降,两种激素含量的变化与Beclin1基因表达量变化趋势基本一致;GA3的含量随诱导时间增加在诱导的第13天达到最大值;而IAA的含量则从第二次取样(诱导第三天)开始随着诱导时间逐渐显著地减少。  本研究深入揭示了拟南芥叶片愈伤组织形成过程中PCD发生过程中相关基因和激素的作用,为进一步研究植物PCD提供了重要的分子生物学基础,对植物的发育、抗逆和抗病机理的深入研究具有重要的科学参考价值。
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