SIV H1N1亚型HA基因的真核表达及基因免疫

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  本论文以国内分离的1株SIVH1N1亚型流行毒株为研究对象。参考GenBank中已发表的SIVHA基因序列,设计、合成了一对含有BamHI和HindⅢ酶切位点以及ATG起始密码子的引物,通过RT-PCR扩增出HA基因,并克隆到PMD-18-TVector载体中获得重组质粒PMD-HA,经序列测定后与GenBank中不同地方SIV流行株HA基因进行序列分析比较。   用BamHI和XhoI双酶切PMD-HA后,将HA片段克隆到真核表达载体pcDNA-3.1(+)中,得到重组质粒pcDNA-HA。   大量提取、纯化质粒pcDNA-HA和PCI-IL-6,与常规SIVH1N1亚型灭活疫苗分别免疫6w龄的BALB/c小鼠进行试验。   本实验成功构建了SIVH1N1亚型的主要抗原蛋白HA基因的真核表达质粒pcDNA-HA,能够在Vero细胞中进行瞬时表达。用表达质粒pcDNA-HA和PCI-IL-6免疫BALB/c小鼠,机体细胞免疫应答明显增强,对SIVH1N1攻毒具有免疫保护效果。其免疫保护效果比单独用pcDNA-HA的免疫效果也有提高,证实了PCI-IL-6的免疫增强作用,尽管其免疫保护效果未能达到常规灭活疫苗的效果,但提示具有深入研究的价值和SIVHA基因疫苗潜在的应用前景,为进一步研究SIV基因疫苗奠定了实验研究基础。
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