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目的：探索一种行之有效的直接原位PCR实验方法，建立一套优化的石蜡切片组织直接原位PCR的反应体系和反应条件，应用于霍奇金淋巴瘤的恶性成分-H/R-S细胞的起源、克隆性及其与背景淋巴细胞相关性的研究。
方法：1．采用免疫组化(Envision 法)，对3例霍奇金淋巴瘤石蜡组织中H/R-S细胞的κ和λ抗原表达情况进行检测。2．直接原位PCR实验方法、反应体系和反应条件的优化：(1)消化条件的优化：再固定时间自30分钟开始，每30分钟为一个时间段递增；消化浓度自10μg/ml开始，每次递增5μg/ml；消化时间设置5、10、15、20、25、30分钟6个时间段，以组织结构出现模糊的前一个时间段和相应的再固定时间和消化浓度为该组织最佳的消化条件；(2)防干片方法：增大总反应体系至50 μl，滴加反应液前，组织不能干片，盖玻片进行内、外双层密封；(3)防脱片方法： 2％APES硅化，组织切片进行30分钟以上的再固定；(4)反应体系的优化：自液相PCR的2倍用量开始设置各成分的浓度梯度，循环次数25-40次，各对引物的退火温度自最低Tm值开始，每次递增1℃。3．采用直接原位PCR法，5’-生物素标记的Vκ1/Jκ124、Vκ2/Jκ124、Vκ3/Jκ3、Vκ4/Jκ124、Vκ5/Jκ5、Vκ6/Jκ混合等6对κ家族特异性引物对3例霍奇金淋巴瘤组织H/R-S细胞的κ轻链基因重排情况进行检测。
结论：1．仅仅从蛋白表达水平对HL的起源和克隆性等问题进行研究是远远不够的，其结果只能起到参考作用，还必须结合显微切割和单细胞基因分析或原位PCR的实验结果综合分析。2．本实验采用的直接原位PCR的实验方法、优化的反应体系和反应条件，在石蜡切片组织上进行直接原位PCR是切实可行和有效的。3．本例NSHL的H/R-S细胞起源于B淋巴细胞，且可能为多克隆性增生，H/R-S细胞与其周围部分背景淋巴细胞间可能存在克隆相关性，即可能来自同一个B细胞克隆。