不同分子量、不同脱乙酰度壳寡糖的制备及其生物活性研究

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目的:制备不同分子量、不同脱乙酰度壳寡糖;研究各壳寡糖样品抗氧化活性、抑制蛋白非酶糖基化作用及其对内源性一氧化氮含量的影响。  方法:通过纤维素酶降解壳聚糖及壳寡糖乙酰化法制备五种不同壳寡糖样品,依次命名为HD90、MD90、LD90、MD70、MD50,并对各壳寡糖样品进行红外结构分析,同时测定其分子量和脱乙酰度。通过测定各壳寡糖样品对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基的清除作用,以及对红细胞溶血率的影响来综合考察壳寡糖的抗氧化活性。通过NBT还原实验和测定糖基化终产物(AGEs)荧光强度研究各壳寡糖样品对糖基化的干预作用。通过检测高糖培育下红细胞内NO含量了解各壳寡糖样品对内源性NO的影响。  结果:HD90、MD90、LD90的脱乙酰度均为90.3%,相对分子量分别为1917.8、1291.5、763.4; MD70、 MD50相对分子量均为1291.5,脱乙酰度分别为70.8%和53.6%。IR图谱表明各壳寡糖均存在多糖吸收峰,低脱乙酰度壳寡糖MD70和MD50出现典型酰基吸收峰。各壳寡糖样品均可清除DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基,清除率由大到小依次为HD90>MD90>LD90>MD70>MD50,其中抗氧化效果最好为HD90。红细胞溶血率HD90<MD90<LD90<MD70<MD50,其中HD90的溶血率最低为27.8%。糖基化NBT还原实验结果中,抑制率由大到小依次为HD90>MD90>LD90>MD70>MD50;AGEs荧光强度结果中,抑制率由大到小依次为HD90>MD90>LD90>MD70>MD50,但均弱于阳性对照氨基胍。高糖培养下的红细胞中NO含量结果中,HD90、MD90、LD90在5 mg/mL时NO含量分别为1.2191、0.8604、0.4647μmol/L,生物活性均强于MD70(0.3960μmol/L)和MD50(0.2938μmol/L)。  结论:各壳寡糖样品具有一定程度的抗氧化活性,可以有效地抑制蛋白非酶糖基化过程,同时可以提高内源性NO含量,其中高分子量、高脱乙酰度的壳寡糖表现的生物活性最强,说明壳寡糖的生物活性与其结构组成有密切关系。
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